一种新型阿魏酸酯酶及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN109402087B

    公开(公告)日:2021-07-13

    申请号:CN201811494573.9

    申请日:2018-12-07

    Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因,其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。将该酯酶基因插入到质粒pET‑28a(+)后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(BDS4)分子量为38.8kDa。此外,本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解邻苯二甲酸二甲酯,邻苯二甲酸二乙酯,邻苯二甲酸二丁酯等多种塑化剂。定点诱变实验表明BDS4的催化三联体由丝氨酸(S158),天冬氨酸(D256)和组氨酸(H286)组成,三者中任何氨基酸的突变都会导致BDS4失去催化能力。在木聚糖酶的存在下,BDS4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶,由于其特有的活性及酶学特性,使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。

    一种新型阿魏酸酯酶及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN109402087A

    公开(公告)日:2019-03-01

    申请号:CN201811494573.9

    申请日:2018-12-07

    Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因,其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。将该酯酶基因插入到质粒pET-28a(+)后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(BDS4)分子量为38.8kDa。此外,本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解邻苯二甲酸二甲酯,邻苯二甲酸二乙酯,邻苯二甲酸二丁酯等多种塑化剂。定点诱变实验表明BDS4的催化三联体由丝氨酸(S158),天冬氨酸(D256)和组氨酸(H286)组成,三者中任何氨基酸的突变都会导致BDS4失去催化能力。在木聚糖酶的存在下,BDS4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶,由于其特有的活性及酶学特性,使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。

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