公开(公告)号：CN110982803B

公开(公告)日：2022-09-27

申请号：CN201911359278.7

申请日：2019-12-25

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 辛志宏 ,  邱佳容 ,  张月琦 ,  姜俊伟 ,  吴盛露 ,  李龙祥 ,  邵玉庭

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因组文库的新型邻苯二甲酸酯水解酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.l和SEQ ID N0.2所示。将该酯酶基因连接到表达载体pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(EstJ6)分子量为33.31kDa。EstJ6对邻苯二甲酸酯具有广泛的底物特异性，EstJ6不仅可以水解具有简单侧链的邻苯二甲酸酯，而且可以水解具有复杂且较长侧链的邻苯二甲酸二乙基己酯和邻苯二甲酸单乙基己酯。此外，定点突变实验表明EstJ6的催化三联体残基为S146‑E240‑H270，三者中任何氨基酸的突变都会导致EstJ6失去催化能力。本发明中的新型邻苯二甲酸酯水解酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于食品工业、农业及生物技术等领域。

公开(公告)号：CN110982803A

公开(公告)日：2020-04-10

申请号：CN201911359278.7

申请日：2019-12-25

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 辛志宏 ,  邱佳容 ,  张月琦 ,  姜俊伟 ,  吴盛露 ,  李龙祥 ,  邵玉庭

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因组文库的新型邻苯二甲酸酯水解酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.l和SEQ ID N0.2所示。将该酯酶基因连接到表达载体pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(EstJ6)分子量为33.31kDa。EstJ6对邻苯二甲酸酯具有广泛的底物特异性，EstJ6不仅可以水解具有简单侧链的邻苯二甲酸酯，而且可以水解具有复杂且较长侧链的邻苯二甲酸二乙基己酯和邻苯二甲酸单乙基己酯。此外，定点突变实验表明EstJ6的催化三联体残基为S146-E240-H270，三者中任何氨基酸的突变都会导致EstJ6失去催化能力。本发明中的新型邻苯二甲酸酯水解酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于食品工业、农业及生物技术等领域。