公开(公告)号：CN107858401A

公开(公告)日：2018-03-30

申请号：CN201711050889.4

申请日：2017-10-31

Applicant: 重庆邮电大学

Inventor： 浦丹 ,  舒坤贤 ,  沈辰辰 ,  唐曼妮 ,  陈慧敏

IPC: C12Q1/6806

CPC classification number: C12Q1/6806 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2527/107 ,  C12Q2525/186

Abstract: 本发明公开了一种低丰度基因突变的富集方法，本发明方法在PCR反应体系中使用高保真DNA聚合酶和3'末端碱基在基因突变位点上且3'末端被封闭的引物，并加入3'末端被封闭的含所述突变位点的核苷酸单链，通过设置关键变性温度Tc使所述3'末端被封闭的核苷酸单链与突变型序列杂交形成的异源双链DNA解链，但与野生型序列杂交形成的同源双链DNA不能解链，然后引物退火后高保真DNA聚合酶将3'末端被封闭且3'末端碱基错配的引物的配错碱基移除使其继续延伸，从而选择性地从大量野生型序列中扩增低丰度突变序列，使突变序列得以富集。该发明操作简单易行且扩增准确度和灵敏度高，可应用于医学和生物学的诸多领域。