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公开(公告)号：CN113005045B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202110269600.8
申请日：2021-03-12
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明涉及一株含突变纳豆激酶重组基因的工程菌及其构建方法和应用。以枯草芽孢杆菌基因为模板，PCR扩增得纳豆激酶前导肽‑成熟肽基因片段NKt；以NKt基因片段为模板，扩增NKt194突变片段；将NKt194突变片段按毕赤酵母X33密码子偏好性进行优化和合成得NKt2；构建PGAPZα‑A‑NKt2，将PGAPZα‑A‑NKt2转化毕赤酵母X33构建真核表达系统的纳豆激酶重组基因工程菌株；培养纳豆激酶重组基因工程菌株，诱导纳豆激酶表达。本发明成功构建一株突变纳豆激酶重组基因工程菌LNF012及在真核系统中表达，使原核生物的纳豆激酶基因在真核生物体系中成功表达，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113265345B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202110559185.X
申请日：2021-05-21
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明涉及一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌及其构建方法和应用。以pGAPZα‑A质粒为模板PCR扩增获得启动子GAP基因片段；将扩增的启动子GAP基因片段通过双酶切后，连接到pGAPZα‑A‑NKt2上，构建pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体；将pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体通过电转化毕赤酵母X33中，获得双启动子系统重组基因工程菌LNF013。本发明成功构建双启动子毕赤酵母真核体系表达的纳豆激酶重组基因工程菌，纳豆激酶表达量及酶活性显著提高，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113005045A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110269600.8
申请日：2021-03-12
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明涉及一株含突变纳豆激酶重组基因的工程菌及其构建方法和应用。以枯草芽孢杆菌基因为模板，PCR扩增得纳豆激酶前导肽‑成熟肽基因片段NKt；以NKt基因片段为模板，扩增NKt194突变片段；将NKt194突变片段按毕赤酵母X33密码子偏好性进行优化和合成得NKt2；构建PGAPZα‑A‑NKt2，将PGAPZα‑A‑NKt2转化毕赤酵母X33构建真核表达系统的纳豆激酶重组基因工程菌株；培养纳豆激酶重组基因工程菌株，诱导纳豆激酶表达。本发明成功构建一株突变纳豆激酶重组基因工程菌LNF012及在真核系统中表达，使原核生物的纳豆激酶基因在真核生物体系中成功表达，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113265345A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110559185.X
申请日：2021-05-21
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明涉及一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌及其构建方法和应用。以pGAPZα‑A质粒为模板PCR扩增获得启动子GAP基因片段；将扩增的启动子GAP基因片段通过双酶切后，连接到pGAPZα‑A‑NKt2上，构建pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体；将pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体通过电转化毕赤酵母X33中，获得双启动子系统重组基因工程菌LNF013。本发明成功构建双启动子毕赤酵母真核体系表达的纳豆激酶重组基因工程菌，纳豆激酶表达量及酶活性显著提高，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
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