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公开(公告)号：CN103255138B
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201310088900.1
申请日：2013-03-20
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法，采用化学合成的方法获得b12抗体重链和轻链的可变区，用重叠PCR方法拼接得到scFv基因，利用原核表达系统，在室温和IPTG终浓度为0.5mM的条件下，诱导表达的b12-scFv大约有70％以可溶性蛋白的形式存在，用镍柱一步纯化便可获得高纯度的可溶性scFv，从1L培养液中能获得约2mg纯化的可溶性蛋白。本发明获得的b12单链抗体可溶性好，表达量尚佳，纯化过程简单，抗原结合能力好。用基因工程的方法在体外大量制备该抗体，可用于艾滋病的被动免疫防治；在基于包膜蛋白的HIV-1重组疫苗的设计中，也可用于b12抗原表位的检测，在HIV-1的被动免疫治疗和免疫原检测中具有一定的应用前景。
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公开(公告)号：CN110452926B
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN201910724103.5
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV‑2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，重组杆状病毒为载体表达的ORF25融合蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNO:3。本发明以截短的CyHV‑2糖蛋白ORF25为抗原基因，构建重组杆状病毒，成功将ORF25展示在病毒表面。用该重组病毒转导鲫鱼细胞，ORF25在鲫鱼细胞表达并展示在细胞表面。以该重组病毒作为CyHV‑2疫苗对异育银鲫进行浸泡免疫，攻毒试验表明该重组杆状病毒免疫可以对CyHV‑2感染提供83.3％的相对保护率。
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公开(公告)号：CN110387385A
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201910650551.5
申请日：2019-07-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , C07K14/435
Abstract: 本发明公开了一种新型杆状病毒表达载体，涉及生物技术领域。本发明将杆状病毒表达载体上四个连续的非必需基因Ac84、Ac85、Ac86和Ac87同时敲除后即获得所述新型杆状病毒表达载体。本发明的新型杆状病毒表达载体使外源蛋白表达水平提高80％。同时病毒的增殖特性不受影响。表达产量的提高能显著降低企业的生产成本。该杆状病毒表达载体可用于生物制品工业领域，特别是亚单位疫苗工业领域。
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公开(公告)号：CN103255138A
公开(公告)日：2013-08-21
申请号：CN201310088900.1
申请日：2013-03-20
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法，采用化学合成的方法获得b12抗体重链和轻链的可变区，用重叠PCR方法拼接得到scFv基因，利用原核表达系统，在室温和IPTG终浓度为0.5mM的条件下，诱导表达的b12-scFv大约有70％以可溶性蛋白的形式存在，用镍柱一步纯化便可获得高纯度的可溶性scFv，从1L培养液中能获得约2mg纯化的可溶性蛋白。本发明获得的b12单链抗体可溶性好，表达量尚佳，纯化过程简单，抗原结合能力好。用基因工程的方法在体外大量制备该抗体，可用于艾滋病的被动免疫防治；在基于包膜蛋白的HIV-1重组疫苗的设计中，也可用于b12抗原表位的检测，在HIV-1的被动免疫治疗和免疫原检测中具有一定的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110387385B
公开(公告)日：2022-07-15
申请号：CN201910650551.5
申请日：2019-07-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , C07K14/435
Abstract: 本发明公开了一种新型杆状病毒表达载体，涉及生物技术领域。本发明将杆状病毒表达载体上四个连续的非必需基因Ac84、Ac85、Ac86和Ac87同时敲除后即获得所述新型杆状病毒表达载体。本发明的新型杆状病毒表达载体使外源蛋白表达水平提高80％。同时病毒的增殖特性不受影响。表达产量的提高能显著降低企业的生产成本。该杆状病毒表达载体可用于生物制品工业领域，特别是亚单位疫苗工业领域。
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公开(公告)号：CN110468111B
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN201910724104.X
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV‑2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25C在杆状病毒表面的展示通过将ORF25C的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，以重组杆状病毒为载体表达的ORF25C融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明获得的展示CyHV‑2膜蛋白ORF25C的重组杆状病毒无需注射，可以直接通过简单的浸浴方式为异育银鲫提供免疫保护，对CyHV‑2感染的相对保护率优于已报道的疫苗免疫效果，说明本发明构建的重组杆状病毒可以为CyHV‑2感染的防控提供一种免疫效果好而且使用方法简单、易操作的疫苗。
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公开(公告)号：CN110452926A
公开(公告)日：2019-11-15
申请号：CN201910724103.5
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，重组杆状病毒为载体表达的ORF25融合蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNO:3。本发明以截短的CyHV-2糖蛋白ORF25为抗原基因，构建重组杆状病毒，成功将ORF25展示在病毒表面。用该重组病毒转导鲫鱼细胞，ORF25在鲫鱼细胞表达并展示在细胞表面。以该重组病毒作为CyHV-2疫苗对异育银鲫进行浸泡免疫，攻毒试验表明该重组杆状病毒免疫可以对CyHV-2感染提供83.3％的相对保护率。
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公开(公告)号：CN106636207A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610841372.6
申请日：2016-09-22
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66 , A61K39/00
CPC classification number: C12N15/86 , A61K39/00 , C12N15/66 , C12N2710/14034 , C12N2710/14043
Abstract: 本发明公开了一种抗宿主凋亡的重组杆状病毒载体，通过载体表达靶向昆虫细胞caspase‑1的siRNA，从而实现抗细胞凋亡的杆状病毒表达载体；该杆状病毒载体上含有一段特定的DNA序列，这段DNA序列包括U6启动子及其下游21nt的靶向caspase‑1的siRNA序列；利用该载体制作的重组病毒可以在宿主细胞中表达双链小RNA，通过RNA干扰途径沉默宿主细胞编码的caspase‑1，从而抑制宿主细胞的凋亡。本发明可用于构建表达外源基因的重组杆状病毒；获得的重组杆状病毒感染昆虫细胞后，可抑制宿主细胞凋亡，使外源蛋白表达水平显著提高，从而降低生产成本。
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公开(公告)号：CN110468111A
公开(公告)日：2019-11-19
申请号：CN201910724104.X
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25C在杆状病毒表面的展示通过将ORF25C的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，以重组杆状病毒为载体表达的ORF25C融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明获得的展示CyHV-2膜蛋白ORF25C的重组杆状病毒无需注射，可以直接通过简单的浸浴方式为异育银鲫提供免疫保护，对CyHV-2感染的相对保护率优于已报道的疫苗免疫效果，说明本发明构建的重组杆状病毒可以为CyHV-2感染的防控提供一种免疫效果好而且使用方法简单、易操作的疫苗。
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