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公开(公告)号：CN103255138B
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201310088900.1
申请日：2013-03-20
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法，采用化学合成的方法获得b12抗体重链和轻链的可变区，用重叠PCR方法拼接得到scFv基因，利用原核表达系统，在室温和IPTG终浓度为0.5mM的条件下，诱导表达的b12-scFv大约有70％以可溶性蛋白的形式存在，用镍柱一步纯化便可获得高纯度的可溶性scFv，从1L培养液中能获得约2mg纯化的可溶性蛋白。本发明获得的b12单链抗体可溶性好，表达量尚佳，纯化过程简单，抗原结合能力好。用基因工程的方法在体外大量制备该抗体，可用于艾滋病的被动免疫防治；在基于包膜蛋白的HIV-1重组疫苗的设计中，也可用于b12抗原表位的检测，在HIV-1的被动免疫治疗和免疫原检测中具有一定的应用前景。
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公开(公告)号：CN118421605A
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202310923673.3
申请日：2023-07-26
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N9/64 , C12N15/866 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种基于密码子优化的重组鲎C因子及其生产方法。所述重组鲎C因子的编码序列为SEQ ID NO:1。所述方法包括：将所述重组鲎C因子的编码序列克隆在杆状病毒表达载体，以获得重组杆状病毒；其中所述杆状病毒表达载体包含靶向宿主胱天蛋白酶1的干扰核糖核酸序列；通过所述重组杆状病毒感染昆虫细胞并进行培养，获取培养液上清；其中所述培养液上清用于内毒素检测。所述方法通过对非信号肽区段的低频密码子进行替换得到重组鲎C因子以提高蛋白表达量，以及通过抗凋亡杆状病毒表达载体进一步提高了重组鲎C因子的表达量，从而得到培养液上清可不经过浓缩和纯化而直接稀释用于内毒素检测。
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公开(公告)号：CN103255138A
公开(公告)日：2013-08-21
申请号：CN201310088900.1
申请日：2013-03-20
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法，采用化学合成的方法获得b12抗体重链和轻链的可变区，用重叠PCR方法拼接得到scFv基因，利用原核表达系统，在室温和IPTG终浓度为0.5mM的条件下，诱导表达的b12-scFv大约有70％以可溶性蛋白的形式存在，用镍柱一步纯化便可获得高纯度的可溶性scFv，从1L培养液中能获得约2mg纯化的可溶性蛋白。本发明获得的b12单链抗体可溶性好，表达量尚佳，纯化过程简单，抗原结合能力好。用基因工程的方法在体外大量制备该抗体，可用于艾滋病的被动免疫防治；在基于包膜蛋白的HIV-1重组疫苗的设计中，也可用于b12抗原表位的检测，在HIV-1的被动免疫治疗和免疫原检测中具有一定的应用前景。
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公开(公告)号：CN118006601A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410000007.7
申请日：2024-01-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/866 , C12N7/01 , C12R1/92
Abstract: 本发明公开了一种在草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda,Sf）和粉纹夜蛾（Trichoplusia ni,Tn）细胞中都能抗凋亡的杆状病毒表达载体。根据siRNA引导链与靶RNA识别时能容忍G‑U配对的原理，在Sf‑caspase‑1和Tn‑caspase‑1同源序列中广泛优选能同时在两种细胞系中抑制caspase‑1的shRNA。将所述shRNA编码序列克隆到杆状病毒表达载体上，即得到广谱抗凋亡杆状病毒表达载体。广谱抗凋亡杆状病毒在两种细胞系中都有良好的抗细胞凋亡效果；由于病毒感染后细胞凋亡延迟，外源蛋白表达水平显著提高。外源蛋白产量的提高能够降低工业生产成本。本发明在蛋白制品和疫苗工业领域具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110468111A
公开(公告)日：2019-11-19
申请号：CN201910724104.X
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25C在杆状病毒表面的展示通过将ORF25C的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，以重组杆状病毒为载体表达的ORF25C融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明获得的展示CyHV-2膜蛋白ORF25C的重组杆状病毒无需注射，可以直接通过简单的浸浴方式为异育银鲫提供免疫保护，对CyHV-2感染的相对保护率优于已报道的疫苗免疫效果，说明本发明构建的重组杆状病毒可以为CyHV-2感染的防控提供一种免疫效果好而且使用方法简单、易操作的疫苗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110468111B
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN201910724104.X
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV‑2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25C在杆状病毒表面的展示通过将ORF25C的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，以重组杆状病毒为载体表达的ORF25C融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明获得的展示CyHV‑2膜蛋白ORF25C的重组杆状病毒无需注射，可以直接通过简单的浸浴方式为异育银鲫提供免疫保护，对CyHV‑2感染的相对保护率优于已报道的疫苗免疫效果，说明本发明构建的重组杆状病毒可以为CyHV‑2感染的防控提供一种免疫效果好而且使用方法简单、易操作的疫苗。
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公开(公告)号：CN110452926A
公开(公告)日：2019-11-15
申请号：CN201910724103.5
申请日：2019-08-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , A61K39/245 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，重组杆状病毒为载体表达的ORF25融合蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNO:3。本发明以截短的CyHV-2糖蛋白ORF25为抗原基因，构建重组杆状病毒，成功将ORF25展示在病毒表面。用该重组病毒转导鲫鱼细胞，ORF25在鲫鱼细胞表达并展示在细胞表面。以该重组病毒作为CyHV-2疫苗对异育银鲫进行浸泡免疫，攻毒试验表明该重组杆状病毒免疫可以对CyHV-2感染提供83.3％的相对保护率。
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公开(公告)号：CN106636207A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610841372.6
申请日：2016-09-22
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66 , A61K39/00
CPC classification number: C12N15/86 , A61K39/00 , C12N15/66 , C12N2710/14034 , C12N2710/14043
Abstract: 本发明公开了一种抗宿主凋亡的重组杆状病毒载体，通过载体表达靶向昆虫细胞caspase‑1的siRNA，从而实现抗细胞凋亡的杆状病毒表达载体；该杆状病毒载体上含有一段特定的DNA序列，这段DNA序列包括U6启动子及其下游21nt的靶向caspase‑1的siRNA序列；利用该载体制作的重组病毒可以在宿主细胞中表达双链小RNA，通过RNA干扰途径沉默宿主细胞编码的caspase‑1，从而抑制宿主细胞的凋亡。本发明可用于构建表达外源基因的重组杆状病毒；获得的重组杆状病毒感染昆虫细胞后，可抑制宿主细胞凋亡，使外源蛋白表达水平显著提高，从而降低生产成本。
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公开(公告)号：CN118995821A
公开(公告)日：2024-11-22
申请号：CN202411327075.0
申请日：2024-09-23
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/34 , C12N7/01 , C12R1/92
Abstract: 本发明公开了一种表达因子过表达的杆状病毒表达载体。本发明在杆状病毒ie0基因编码区上游插入杆状病毒晚期启动子，使IE0/IE1能够在病毒感染晚期过表达。IE0/IE1过表达显著提高了极晚期启动子控制的外源基因的表达水平。表达产量的提高能降低企业的生产成本。该杆状病毒载体可用于生物制品工业领域。
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公开(公告)号：CN118389600A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410740547.9
申请日：2024-06-09
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/67 , C12N15/34
Abstract: 本发明公开了一种表达因子过表达的杆状病毒表达载体。杆状病毒极晚期表达因子VLF‑1（Very late Factor 1）是病毒极晚期启动子p10和polh高频转录所必需的调控因子。本发明在杆状病毒vlf‑1基因编码区上游插入杆状病毒中等强度启动子，使vlf‑1能够在病毒感染晚期以适当的水平表达。vlf‑1适当过表达显著提高了p10和polh启动子的表达水平。表达产量的提高能降低企业的生产成本。该杆状病毒载体可用于生物制品工业领域。
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