利用创制小麦TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体提高小麦产量的方法

    公开(公告)号:CN113817767B

    公开(公告)日:2023-09-12

    申请号:CN202110954599.2

    申请日:2021-08-19

    Inventor: 赵惠贤 郭利建

    Abstract: 本发明涉及利用创制小麦TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体提高小麦产量方法,在小麦TaOTUB1基因序列中寻找合适的sgRNA位点,构建小麦基因组编辑载体PBUE411‑sgRNA(otub1),并导入到农杆菌菌系EHA105;利用携带PBUE411‑sgRNA(otub1)载体的农杆菌菌系EHA105遗传转化小麦幼胚愈伤组织;用检测试剂盒及酶切筛选小麦TaOTUB1的三个部分同源基因突变的小麦再生植株;TaOTUB1基因突变的再生植株温室加代、连续自交,用HI‑TOM检测试剂盒及酶切筛选TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体植株,并用叶片涂抹草铵膦鉴定筛选不含PBUE411‑sgRNA(otub1)编辑载体的植株;获得不含外源载体的TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体植株otub1。其分蘖数和穗粒数显著增多,种子大小和粒重显著增大,单株籽粒产量显著提高,但对其它性状没有显著影响;具有定向、快速、有效、可重复性好的特点。

    低温诱导位点特异性重组删除的无标记转化方法

    公开(公告)号:CN110129364A

    公开(公告)日:2019-08-16

    申请号:CN201910231220.8

    申请日:2019-03-26

    Abstract: 本发明公开了一种低温诱导位点特异性重组删除的无标记转化方法,该方法首先构建低温诱导WCS120启动子驱动的ParA/MRS位点特异性重组系统植物表达载体;通过农杆菌转化法转化小麦,筛选获得转基因植株;然后进行转基因后代标记基因删除检测和抗旱性检测,建立小麦无选择标记基因转化体系,获得无选择标记基因转化植株。对小麦基因工程遗传改良有非常重要意义。

    单嘧磺酯及其钠盐用于制备植物化学杂交剂的应用

    公开(公告)号:CN102812960A

    公开(公告)日:2012-12-12

    申请号:CN201210282567.3

    申请日:2012-08-10

    Abstract: 本发明公开了化合物2-甲酸甲酯-N-[2-(4甲基嘧啶基)]苯磺酰脲及其钠盐用于制备芸苔属植物化学杂交剂的应用,其结构式为:及其Na+盐该化合物原药纯品为白色颗粒状固体,商品名:单嘧磺酯及其钠盐,理化性质:熔点179℃~180℃,分子质量:350.35;分解温度>200℃;溶解度(g/L,20℃):易溶于N,N-二甲基甲酰胺(24.68),可溶于四氢呋喃(4.83),丙酮(2.09),微溶于甲醇(0.30),不溶于水(0.06),碱性条件下可溶于水。在中性或弱碱性条件下稳定,在强酸或强碱条件下易发生水解。其制备的化学杂交剂对芸苔属植物具有良好的雄性不育诱导效果,是一种高效、低毒、低残留、低价位的芸苔属植物化学杂交剂。

    利用创制小麦TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体提高小麦产量的方法

    公开(公告)号:CN113817767A

    公开(公告)日:2021-12-21

    申请号:CN202110954599.2

    申请日:2021-08-19

    Inventor: 赵惠贤 郭利建

    Abstract: 本发明涉及利用创制小麦TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体提高小麦产量方法,在小麦TaOTUB1基因序列中寻找合适的sgRNA位点,构建小麦基因组编辑载体PBUE411‑sgRNA(otub1),并导入到农杆菌菌系EHA105;利用携带PBUE411‑sgRNA(otub1)载体的农杆菌菌系EHA105遗传转化小麦幼胚愈伤组织;用检测试剂盒及酶切筛选小麦TaOTUB1的三个部分同源基因突变的小麦再生植株;TaOTUB1基因突变的再生植株温室加代、连续自交,用HI‑TOM检测试剂盒及酶切筛选TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体植株,并用叶片涂抹草铵膦鉴定筛选不含PBUE411‑sgRNA(otub1)编辑载体的植株;获得不含外源载体的TaOTUB1基因功能缺失纯合突变体植株otub1。其分蘖数和穗粒数显著增多,种子大小和粒重显著增大,单株籽粒产量显著提高,但对其它性状没有显著影响;具有定向、快速、有效、可重复性好的特点。

    用重组大麦条斑花叶病毒介导的小麦穗部和籽粒靶标基因沉默方法

    公开(公告)号:CN102533850B

    公开(公告)日:2013-05-22

    申请号:CN201110450603.8

    申请日:2011-12-20

    Inventor: 赵惠贤 马猛

    Abstract: 本发明涉及一种用重组大麦条斑花叶病毒(BSMV)介导的小麦穗部和籽粒靶标基因沉默的方法,主要通过用携带靶标基因片段的重组BSMV的α、β、γcDNA体外转录物等量混合后接种抽穗期~扬花期小麦穗,实现穗部和种子靶标基因表达的沉默。相对于现有的基于转基因的小麦穗部和种子RNAi技术方法,其具有简单、快速、准确、可重复性好的特点。

    用重组大麦条斑花叶病毒介导的小麦穗部和籽粒靶标基因沉默方法

    公开(公告)号:CN102533850A

    公开(公告)日:2012-07-04

    申请号:CN201110450603.8

    申请日:2011-12-20

    Inventor: 赵惠贤 马猛

    Abstract: 本发明涉及一种用重组大麦条斑花叶病毒(BSMV)介导的小麦穗部和籽粒靶标基因沉默的方法,主要通过用携带靶标基因片段的重组BSMV的α、β、γcDNA体外转录物等量混合后接种抽穗期~扬花期小麦穗,实现穗部和种子靶标基因表达的沉默。相对于现有的基于转基因的小麦穗部和种子RNAi技术方法,其具有简单、快速、准确、可重复性好的特点。

    建立油菜细胞质类型特异PCR标记以及快速鉴定油菜细胞质类型的方法

    公开(公告)号:CN101608198A

    公开(公告)日:2009-12-23

    申请号:CN200910022297.0

    申请日:2009-04-30

    Abstract: 本发明公开了一种建立油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记的方法,以及利用建立的该油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记,用于快速鉴定油菜细胞质类型的用途。本发明主要通过以已知细胞质类型油菜和待鉴定的油菜基因组DNA为模板,用3对特异PCR引物,对已知Nap、Pol、Cam、Ogu和改良Ogu细胞质类型油菜基因组DNA进行一步多重PCR扩增,以及扩增产物的分析,建立了Nap、Pol、Cam、Ogu和改良Ogu细胞质类型油菜一步多重PCR特异标记,根据这些特异分子标记,可以快速鉴定出待测甘蓝型油菜的细胞质类型。用本发明方法鉴定油菜细胞质类型,具有快速、简单、结果准确、成本低廉、可重复性好的特点。

    用重组大麦条斑花叶病毒载体介导的小麦靶标miRNA过表达方法

    公开(公告)号:CN106834344A

    公开(公告)日:2017-06-13

    申请号:CN201710046709.9

    申请日:2017-01-22

    Inventor: 赵惠贤 简超 韩冉

    Abstract: 本发明公开了一种用重组大麦条斑花叶病毒(BSMV)介导的小麦靶miRNA过表达方法,主要通过用携带靶miRNA前体片段的重组BSMV的α、β、γcDNA体外转录物等量混合后接种小麦3‑5叶期幼苗完全展开新叶或扬花期小麦穗部,实现小麦内源靶miRNA过表达。相对于现有的基于转基因的小麦miRNA过表达技术方法,其具有简单、快速、准确、可重复性好的特点。

    建立油菜细胞质类型特异PCR标记以及快速鉴定油菜细胞质类型的方法

    公开(公告)号:CN101608198B

    公开(公告)日:2012-05-23

    申请号:CN200910022297.0

    申请日:2009-04-30

    Abstract: 本发明公开了一种建立油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记的方法,以及利用建立的该油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记,用于快速鉴定油菜细胞质类型的用途。本发明主要通过以已知细胞质类型油菜和待鉴定的油菜基因组DNA为模板,用3对特异PCR引物,对已知Nap、Pol、Cam、Ogu和改良Ogu细胞质类型油菜基因组DNA进行一步多重PCR扩增,以及扩增产物的分析,建立了Nap、Pol、Cam、Ogu和改良Ogu细胞质类型油菜一步多重PCR特异标记,根据这些特异分子标记,可以快速鉴定出待测甘蓝型油菜的细胞质类型。用本发明方法鉴定油菜细胞质类型,具有快速、简单、结果准确、成本低廉、可重复性好的特点。

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