公开(公告)号：CN107365383B

公开(公告)日：2019-04-30

申请号：CN201710563955.1

申请日：2017-07-12

Applicant: 苏州大学附属第一医院

Inventor： 黄子逸

IPC: C07K16/28 ,  C12N15/85 ,  A61K39/395 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开的一种人源化抗人PD‑1单克隆抗体，重链可变区VH氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，制备上述抗体的方法，包括(1)提取杂交瘤细胞的cDNA；(2)克隆重链可变区VH和轻链可变区VL；(3)VH和VL分别与克隆载体连接；(4)菌落进行基因序列测序鉴定；(5)保留比对正确的重轻链可变区序列；(6)扩大培养；(7)转染真核表达细胞株293；(8)去除上清液中杂质并过滤除菌；还公开了抗体的用途及药物，抑制活化T细胞体外增殖，和/或抑制活化T细胞分泌相关细胞因子。本发明的优点在于，丰富了抗体的类型，该抗体可以用于阻断PD‑1/PD‑L1负性信号，促进T细胞增值，激活T细胞生物学功能。

公开(公告)号：CN107365383A

公开(公告)日：2017-11-21

申请号：CN201710563955.1

申请日：2017-07-12

Applicant: 苏州大学附属第一医院

Inventor： 黄子逸

IPC: C07K16/28 ,  C12N15/85 ,  A61K39/395 ,  A61P35/00

CPC classification number: C07K16/2818 ,  A61K2039/505 ,  C07K2317/24 ,  C07K2317/56

Abstract: 本发明公开的一种人源化抗人PD-1单克隆抗体，重链可变区VH氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，制备上述抗体的方法，包括(1)提取杂交瘤细胞的cDNA；(2)克隆重链可变区VH和轻链可变区VL；(3)VH和VL分别与克隆载体连接；(4)菌落进行基因序列测序鉴定；(5)保留比对正确的重轻链可变区序列；(6)扩大培养；(7)转染真核表达细胞株293；(8)去除上清液中杂质并过滤除菌；还公开了抗体的用途及药物，抑制活化T细胞体外增殖，和/或抑制活化T细胞分泌相关细胞因子。本发明的优点在于，丰富了抗体的类型，该抗体可以用于阻断PD-1/PD-L1负性信号，促进T细胞增值，激活T细胞生物学功能。

公开(公告)号：CN102329781A

公开(公告)日：2012-01-25

申请号：CN201110314777.1

申请日：2011-10-17

Applicant: 苏州大学

Inventor： 张学光 ,  黄子逸 ,  王雪峰

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/24 ,  A61K39/395 ,  A61P31/22 ,  A61P35/00 ,  A61P37/02

Abstract: 本发明属于遗传工程领域，涉及肿瘤坏死因子超家族成员的结合蛋白质或多肽，本发明公开了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为一种分泌小鼠抗人LIGHT分子单克隆抗体杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CGMCC No.4788。本发明同时公开了一种抗人LIGHT单克隆抗体，所述抗人LIGHT单克隆抗体为上述杂交瘤细胞株产生得到。该抗人LIGHT单克隆抗体能阻断HVEM/LIGTH结合，以剂量依赖方式抑制CD3激发型单抗协同转基因细胞株L929/LIGHT对T淋巴细胞体外增殖和细胞因子分泌的促进作用。因此，所述抗人LIGHT单克隆抗体可应用于制备抑制T细胞体外增殖的药物中或抑制T细胞分泌相关细胞因子的药物。

公开(公告)号：CN109251891A

公开(公告)日：2019-01-22

申请号：CN201811107312.7

申请日：2018-09-21

Applicant: 苏州大学附属第一医院

Inventor： 古彦铮 ,  张学光 ,  黄子逸 ,  刘翠平

IPC: C12N5/078

Abstract: 本发明公开了一种CD40联合PD-L及细胞因子扩增PBMC的方法，步骤如下：1)取正常人外周血，与PBS混合稀释后进行Ficoll密度梯度离心；2)离心结束后，得到4层液体；用移液管吸取中间云雾层细胞，用10倍体积的PBS洗涤离心，得到PBMC；3)将PBMC细胞用RMPI1640完全培养基配成细胞悬液，转入6孔板和24孔板里，然后于各组细胞培养液中加入相应细胞因子液：将孔板放到CO2培养箱内培养；4)视细胞状态每隔2～3天补加一次细胞因子液。本发明从CD40信号联合PD-L1及细胞因子IL-15和IL-7组合扩增PBMC制备新型过继免疫治疗细胞为切入点，提供一种新的过继免疫细胞的体外诱导方案。此外，本发明所提供的方法实验设备要求低、操作简单省时、过继免疫细胞的收集率高、纯度高。

公开(公告)号：CN109251891B

公开(公告)日：2021-10-22

申请号：CN201811107312.7

申请日：2018-09-21

Applicant: 苏州大学附属第一医院

Inventor： 古彦铮 ,  张学光 ,  黄子逸 ,  刘翠平

IPC: C12N5/078

Abstract: 本发明公开了一种CD40联合PD‑L1及细胞因子扩增PBMC的方法，步骤如下：1）取正常人外周血，与PBS混合稀释后进行Ficoll密度梯度离心；2）离心结束后，得到4层液体；用移液管吸取中间云雾层细胞，用10倍体积的PBS洗涤离心，得到PBMC；3）将PBMC细胞用RMPI1640完全培养基配成细胞悬液，转入6孔板和24孔板里，然后于各组细胞培养液中加入相应细胞因子液：将孔板放到CO2培养箱内培养；4）视细胞状态每隔2~3天补加一次细胞因子液。本发明从CD40信号联合PD‑L1及细胞因子IL‑15和IL‑7组合扩增PBMC制备新型过继免疫治疗细胞为切入点，提供一种新的过继免疫细胞的体外诱导方案。此外，本发明所提供的方法实验设备要求低、操作简单省时、过继免疫细胞的收集率高、纯度高。