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公开(公告)号：CN114058641B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN202210046808.8
申请日：2022-01-17
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明涉及一种载体系统和应用及通过其降解目的蛋白的方法。载体系统包括含有目的基因sgRNA及Cas9的表达载体，含有目的基因和生长素诱导降解因子AID的融合表达载体，含有生长素受体—水稻F‑box转运抑制性响应蛋白1OsTIR1的表达载体，以及含有转座酶的表达载体；其中，含有目的基因sgRNA及Cas9的表达载体为分别含有目的基因sgRNA的表达载体和含有Cas9的表达载体，或同时含有目的基因sgRNA和Cas9的表达载体。用生长素处理稳定转染该载体系统的细胞，解决了传统AID系统敲入步骤繁琐、双等位基因插入效率低以及存在基础降解的问题。
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公开(公告)号：CN108441520B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201810300747.7
申请日：2018-04-04
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9系统构建的基因条件性敲除方法：在待敲除区域左侧和右侧分别选取LoxP‑抗生素‑LoxP和FRT‑抗生素‑FRT‑LoxP序列插入位点；在待插入位点的上下游选取左右同源臂，扩增并纯化，酶切、连接和转化，从而得到包含左侧打靶质粒和右侧打靶质粒；将Cas9质粒、敲除区域左侧或右侧打靶质粒，及其相对应的gRNA表达质粒顺序导入或同时导入目的细胞中，转染后用抗生素筛选，筛选出同时插入了左侧和右侧打靶序列的目的细胞；用4‑OHT和DOX分别诱导Cre‑LoxP和FLP‑FRT介导的同源重组，从而在待敲除区域的左侧和右侧导入loxp位点；用4‑OHT诱导Cre‑LoxP介导的同源重组，得到目的片段敲除的克隆。
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公开(公告)号：CN114058641A
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202210046808.8
申请日：2022-01-17
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明涉及一种载体系统和应用及通过其降解目的蛋白的方法。载体系统包括含有目的基因sgRNA及Cas9的表达载体，含有目的基因和生长素诱导降解因子AID的融合表达载体，含有生长素受体—水稻F‑box转运抑制性响应蛋白1OsTIR1的表达载体，以及含有转座酶的表达载体；其中，含有目的基因sgRNA及Cas9的表达载体为分别含有目的基因sgRNA的表达载体和含有Cas9的表达载体，或同时含有目的基因sgRNA和Cas9的表达载体。用生长素处理稳定转染该载体系统的细胞，解决了传统AID系统敲入步骤繁琐、双等位基因插入效率低以及存在基础降解的问题。
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公开(公告)号：CN108441520A
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201810300747.7
申请日：2018-04-04
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9系统构建的基因条件性敲除方法：在待敲除区域左侧和右侧分别选取LoxP-抗生素-LoxP和FRT-抗生素-FRT-LoxP序列插入位点；在待插入位点的上下游选取左右同源臂，扩增并纯化，酶切、连接和转化，从而得到包含左侧打靶质粒和右侧打靶质粒；将Cas9质粒、敲除区域左侧或右侧打靶质粒，及其相对应的gRNA表达质粒顺序导入或同时导入目的细胞中，转染后用抗生素筛选，筛选出同时插入了左侧和右侧打靶序列的目的细胞；用4-OHT和DOX分别诱导Cre-LoxP和FLP-FRT介导的同源重组，从而在待敲除区域的左侧和右侧导入loxp位点；用4-OHT诱导Cre-LoxP介导的同源重组，得到目的片段敲除的克隆。
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公开(公告)号：CN116622622A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310887969.4
申请日：2023-07-19
Applicant: 苏州大学
IPC: C12N5/073 , C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/55
Abstract: 本发明公开了一种诱导胚胎干细胞定向分化为胚外内胚层干细胞的方法，属于生物技术领域。本发明首先确定了Gata6的内源调控序列，而后利用CRISPR激活技术激活内源性Gata6基因的表达，避免了在细胞中注入基因遗传物质，改变细胞的基因和遗传信息，提高了特异性和安全性。经验证，本发明方法可高效地将ES细胞定向分化为XEN细胞，操作简单，节约了时间、操作和经济成本。
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