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公开(公告)号:CN114940993A
公开(公告)日:2022-08-26
申请号:CN202210647219.5
申请日:2022-06-09
Applicant: 福州大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12R1/63
Abstract: 本发明具体公开一种基于无细胞转录翻译系统的核糖开关,以及在V.vulnificus检测中的应用,实现了无需昂贵仪器设备的V.vulnificus现场检测,且检测结果肉眼可见;本发明中将等温扩增技术RPA与核糖开关相耦合,检测V.vulnificus保守序列的灵敏度为4.30×103copies/μL;经冷冻干燥后的TX‑TL核糖开关检测体系,其活性有所下降,但仍然可实现V.vulnificus保守序列的检测。本发明还通过TX‑TL核糖开关检测体系的重复性试验和特异性试验,证明了该检测方法稳定性好,特异性强,适用于V.vulnificus病原微生物的检测。
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公开(公告)号:CN115838729B
公开(公告)日:2025-01-17
申请号:CN202210921096.X
申请日:2022-08-02
Applicant: 福州大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/10 , G01N33/86 , G01N33/573
Abstract: 本发明公开一种人凝血酶蛋白的核酸适体AS2‑3及其筛选方法和应用,核酸适体AS2‑3的序列如SEQ ID NO:1所示;筛选方法为:在先前筛选得到的人凝血酶蛋白适体的基础上,保留其特定序列进行文库构建,采用Capture‑SELEX方法进行初筛后利用无细胞转录翻译系统的转录过程再次进行筛选,本发明成功得到了既可以与人凝血酶蛋白进行特异性结合,又可以以线性和质粒的形式,在无细胞转录过程中能够响应0.5μM人凝血酶蛋白,而对下游基因转录做出抑制调控的核酸适体序列AS2‑3;通过结合这两种筛选方法,有希望将其应用于其他靶标配体的适体序列筛选,从而有机会代替转录调控因子作为基因元件应用于生物回路中进行调控。
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公开(公告)号:CN115537419B
公开(公告)日:2025-02-11
申请号:CN202211179977.5
申请日:2022-09-27
Applicant: 福州大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/10 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12Q1/6876
Abstract: 本发明公开一种尿苷二磷酸的核酸适体及其筛选方法和应用,核酸适体的序列如SEQ ID NO:1所示;筛选方法为CIVT‑SELEX,即先采用Capture‑SELEX方法进行初筛,得到可以与目标配体结合的单链核酸,然后利用体外转录过程再次进行筛选,从而获得与目标配体结合后发生显著构象变化的核酸适体。本发明成功得到了既能以单链线性的形式检测酶促反应液中的尿苷二磷酸,又可以在体外转录过程中响应不同浓度尿苷二磷酸,而对下游基因转录做出激活调控的核酸适体序列;CIVT‑SELEX有希望应用于其他靶标配体的适体序列筛选,可用于检测和作为基因元件应用于基因回路中进行调控。
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公开(公告)号:CN118910328A
公开(公告)日:2024-11-08
申请号:CN202411059130.2
申请日:2024-08-02
Applicant: 福州大学
IPC: C12Q1/70 , C12N15/11 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a的人腺病毒7型检测体系、检测试剂盒、检测方法及其应用,属于病原微生物快速检测技术领域;所述试剂盒包含Cas12a‑crRNA功能性复合物、用于扩增人腺病毒7型特异性序列的RPA引物对和探针;所述检测方法结合CRISPR‑Cas12a检测系统与RPA技术,通过RPA等温扩增在室温条件下扩增待测目的片段,利用功能性复合物和探针进行CRISPR‑Cas12a检测反应,通过RPA扩增以及crRNA识别双重特异地对人腺病毒7型进行检测;所述检测方法操作简易,且对于人腺病毒7型具有灵敏度高、特异性强的特点,检测限可达到101copies/μL的水平。
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公开(公告)号:CN115838729A
公开(公告)日:2023-03-24
申请号:CN202210921096.X
申请日:2022-08-02
Applicant: 福州大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/10 , G01N33/86 , G01N33/573
Abstract: 本发明公开一种人凝血酶蛋白的核酸适体AS2‑3及其筛选方法和应用,核酸适体AS2‑3的序列如SEQ ID NO:1所示;筛选方法为:在先前筛选得到的人凝血酶蛋白适体的基础上,保留其特定序列进行文库构建,采用Capture‑SELEX方法进行初筛后利用无细胞转录翻译系统的转录过程再次进行筛选,本发明成功得到了既可以与人凝血酶蛋白进行特异性结合,又可以以线性和质粒的形式,在无细胞转录过程中能够响应0.5μM人凝血酶蛋白,而对下游基因转录做出抑制调控的核酸适体序列AS2‑3;通过结合这两种筛选方法,有希望将其应用于其他靶标配体的适体序列筛选,从而有机会代替转录调控因子作为基因元件应用于生物回路中进行调控。
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公开(公告)号:CN118745485A
公开(公告)日:2024-10-08
申请号:CN202410946193.3
申请日:2024-07-15
Applicant: 福州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a的猴痘病毒检测体系、检测试剂盒、检测方法及其应用,属于病原微生物快速检测技术领域;所述试剂盒包含Cas12a‑crRNA功能性复合物、用于扩增猴痘病毒特异性序列的RPA引物对和探针;所述检测方法结合CRISPR‑Cas12a检测系统与RPA技术,通过RPA等温扩增在室温条件下扩增待测目的片段,利用功能性复合物和探针进行CRISPR‑Cas12a检测反应,通过RPA扩增以及crRNA识别双重特异地对猴痘病毒进行检测;所述检测方法操作简易,且对于猴痘病毒具有灵敏度高、特异性强的特点,检测限可达到101copies/μL的水平。
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公开(公告)号:CN118272375A
公开(公告)日:2024-07-02
申请号:CN202410366608.X
申请日:2024-03-28
Applicant: 福建医科大学附属第一医院 , 福州大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/04 , C12R1/01
Abstract: 本发明涉及一种基于无细胞转录翻译系统的沙眼衣原体立足开关及其在检测沙眼衣原体中的应用。所述沙眼衣原体立足开关是根据沙眼衣原体保守序列DNA设计的具有立足结构的RNA序列,可与沙眼衣原体保守序列DNA所转录的RNA发生碱基互补配对,激活lacZ报告基因的表达;所述沙眼衣原体立足开关由sensor RNA和trigger RNA组成;所述sensor RNA为沙眼衣原体立足开关,由sensor DNA体外转录而来;所述trigger RNA用于激活沙眼衣原体立足开关,由trigger DNA体外转录而来。本发明将沙眼衣原体立足开关和无细胞转录翻译系统相结合,无需专门检测仪器和专业技术人员操作,为定性检测沙眼衣原体提供了一个简单的可肉眼观察的比色结果,具有便携、快速、低成本、实时检测等优势。
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公开(公告)号:CN117327811A
公开(公告)日:2024-01-02
申请号:CN202310967633.9
申请日:2023-08-02
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明公开基于RPA‑CRISPR‑Cas12a的常见致病菌快速检测试剂盒及检测方法,所述检测试剂盒包含Cas12a‑crRNA功能性复合物、用于扩增常见致病菌特异性序列的RPA引物对和探针;本发明将CRISPR‑Cas12a检测系统与RPA技术相结合,通过RPA等温扩增在室温条件下扩增目的片段,然后进行CRISPR‑Cas12a检测反应,最后通过荧光检测进行结果的可视化;本发明提供的检测试剂盒具有成本低、操作便捷、耗时短、灵敏度高、特异性强等特点。
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公开(公告)号:CN114940993B
公开(公告)日:2023-07-25
申请号:CN202210647219.5
申请日:2022-06-09
Applicant: 福州大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12R1/63
Abstract: 本发明具体公开一种基于无细胞转录翻译系统的核糖开关,以及在V.vulnificus检测中的应用,实现了无需昂贵仪器设备的V.vulnificus现场检测,且检测结果肉眼可见;本发明中将等温扩增技术RPA与核糖开关相耦合,检测V.vulnificus保守序列的灵敏度为4.30×103copies/μL;经冷冻干燥后的TX‑TL核糖开关检测体系,其活性有所下降,但仍然可实现V.vulnificus保守序列的检测。本发明还通过TX‑TL核糖开关检测体系的重复性试验和特异性试验,证明了该检测方法稳定性好,特异性强,适用于V.vulnificus病原微生物的检测。
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公开(公告)号:CN115537419A
公开(公告)日:2022-12-30
申请号:CN202211179977.5
申请日:2022-09-27
Applicant: 福州大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/10 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12Q1/6876
Abstract: 本发明公开一种尿苷二磷酸的核酸适体及其筛选方法和应用,核酸适体的序列如SEQ ID NO:1所示;筛选方法为CIVT‑SELEX,即先采用Capture‑SELEX方法进行初筛,得到可以与目标配体结合的单链核酸,然后利用体外转录过程再次进行筛选,从而获得与目标配体结合后发生显著构象变化的核酸适体。本发明成功得到了既能以单链线性的形式检测酶促反应液中的尿苷二磷酸,又可以在体外转录过程中响应不同浓度尿苷二磷酸,而对下游基因转录做出激活调控的核酸适体序列;CIVT‑SELEX有希望应用于其他靶标配体的适体序列筛选,可用于检测和作为基因元件应用于基因回路中进行调控。
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