公开(公告)号：CN116121451A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202211383579.5

申请日：2022-11-07

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所 ,  海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心)

Inventor： 曹宗喜 ,  马佳镁 ,  刘光亮 ,  陈素贞 ,  张艳 ,  黄春媛 ,  范悦轩 ,  郑佳馨

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征通用型RT‑RAA荧光型检测方法。涉及的引物序列为：正向引物(5’‑3’)：ATGCCAAATAACAACGGCAAGC；反向引物(5’‑3’)：GCAAACTAAACTCCACAGTGTAACTTAT；探针(5’‑3’)：CAGCCAGTCAATCAGCTGTGCCAAATGC(TexRd)G(THF)G(BHQ2)AAGATCATCGCC‑C3Spacer。利用本发明设计的引物，RNA通过转录成cDNA后，重组酶聚合酶介导的恒温扩增技术(RAA)扩增目标产物，并结合荧光定量PCR仪检测目标产物，可以实现PRRSV的快速、准确检测。利用上述引物，若待测样品存在PRRSV，则检测样品出现扩增曲线，若待测样品不存在PRRSV，检测样品不起峰；本发明方法操作快速，具有特异性强，灵敏度高等特点。

公开(公告)号：CN116162736A

公开(公告)日：2023-05-26

申请号：CN202211383575.7

申请日：2022-11-07

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所 ,  海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心)

Inventor： 曹宗喜 ,  陈素贞 ,  刘光亮

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及基于猪繁殖与呼吸综合征ORF2a基因的RT‑RAA‑LF建立方法，采用的引物序列为：正向引物：AGCTTCACGATTTTCAGCAATGGCT；反向引物(5’‑3’)：Biotin‑ACGTAGCATTGGAATTCGCAACCAC；探针(5’‑3’)：6‑FITC‑AATAGCTGTACATTCCTCCATATTTTCTTC(THF)GTTGCAGCTTCTTGT‑C3Spacer。利用本发明设计的引物，RNA通过逆转录酶M‑MLV成cDNA后，重组酶介导的扩增技术(RAA)扩增目标产物，并使用核酸检测试纸条检测目标产物，可以实现PRRSV的快速、准确检测。利用上述引物，待测样品若存在PRRSV，则试纸条检测结果为阳性，若待测样品不存在PRRSV，则检测结果为阴性；本发明方法操作快速，具有特异性强，灵敏度高等特点。

公开(公告)号：CN116121452A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202211383585.0

申请日：2022-11-07

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所 ,  海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心)

Inventor： 曹宗喜 ,  陈素贞 ,  刘光亮

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及基于猪繁殖与呼吸综合征ORF2a基因的RT‑RPA荧光型建立方法，采用的引物序列为：正向引物：AGCTTCACGATTTTCAGCAATGGCT；反向引物(5’‑3’)：ACGTAGCATTGGAATTCGCAACCAC；探针(5’‑3’)：5'‑AATAGCTGTACATTCCTCCATATTTTCT(HEX‑dT)C(THF)G(BHQ1‑dT)TGCAGCTTCTTGT‑C3Spacer。利用本发明设计的引物，RNA通过逆转录酶M‑MLV逆转录成cDNA后，重组酶介导的扩增技术(RPA)扩增目标产物，并结合实时荧光定量PCR仪，可以实现PRRSV的快速、准确检测。利用上述引物，待测样品若存在PRRSV，则检测结果出现扩增曲线，若待测样品不存在PRRSV，则检测结果不起峰；本发明方法操作快速，具有特异性强，灵敏度高。

公开(公告)号：CN116219068A

公开(公告)日：2023-06-06

申请号：CN202211390927.1

申请日：2022-11-07

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所 ,  海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心)

Inventor： 曹宗喜 ,  黄春媛 ,  刘光亮 ,  马佳镁 ,  陈素贞 ,  张艳 ,  郑佳馨 ,  范悦轩

IPC: C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及基于NSP2基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒RT‑RAA‑LF检测方法及应用。该方法的引物序列为：正向引物(5’‑3’)：AGCCTGTCCCCGCCCCGCGCAGGAA；反向引物(5’‑3’)：Biotin‑CAGTCTGTGAGGAAGCAGACAAATC；探针(5’‑3’)：RAA‑NSP2‑Taq1：FITC‑GTGCCCGCGTCGCGACGTGTCTCCAAGCTG(THE)TGACACCTTTGAGTG‑C3Spacer；RAA‑NSP2‑Taq2：FITC‑GCCGATCCCTGTGCCCGCACCGCGGCGTAA(THE)TTTCAGCAGGTGAA‑C3Spacer；利用本发明设计的引物，RNA通过逆转录酶成cDNA后，再通过重组酶介导的扩增技术(RAA)扩增目标产物，并使用核酸检测试纸条检测目标产物，可以实现PRRSV的快速、准确检测。利用上述引物，待测样品若存在PRRSV，则试纸条检测结果为阳性，根据两个探针的结果，可对PRRSV高致病毒株、经典株进行区分。若待测样品不存在PRRSV高致病毒株或经典株，则相应类型病原的检测结果为阴性；本发明方法操作快速，具有特异性强，灵敏度高等特点。

公开(公告)号：CN116144838A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202211383578.0

申请日：2022-11-07

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所 ,  海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心)

Inventor： 曹宗喜 ,  马佳镁 ,  刘光亮 ,  陈素贞 ,  张艳 ,  黄春媛 ,  范悦轩 ,  郑佳馨

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征通用型RT‑RAA‑LF检测方法。引物序列为：正向引物(5’‑3’)：ATGCCAAATAACAACGGCAAGC；反向引物(5’‑3’)：Biotin‑GCAAACTAAACTCCACAGTGTAACTTAT；探针(5’‑3’)：FITC‑CAGCCAGTCAATCAGCTGTGCCAAATGCTG(THF)GTAAGATCATCGCC‑C3Spacer。利用本发明设计的引物，RNA通过逆转录酶M‑MLV转录成cDNA后，重组酶聚合酶介导的恒温扩增技术(RAA)扩增目标产物，并结合侧流层析试纸条检测目标产物，可以实现PRRSV的快速、准确检测。利用上述引物，若待测样品存在PRRSV，则试纸条检测结果为阳性，若待测样品不存在PRRSV，检测结果为阴性；本发明方法操作快速，具有特异性强，灵敏度高等特点。

公开(公告)号：CN115725798A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202211385878.2

申请日：2022-11-07

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所 ,  海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心)

Inventor： 曹宗喜 ,  黄春媛 ,  刘光亮 ,  马佳镁 ,  陈素贞 ,  张艳 ,  郑佳馨 ,  范悦轩

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及基于NSP2基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒RT‑RAA检测方法及应用。该方法的引物序列为：正向引物(5’‑3’)：AGCCTGTCCCCGCCCCGCGCAGGAA；反向引物(5’‑3’)：CAGTCTGTGAGGAAGCAGACAAATC；探针(5’‑3’)：RAA‑HTaq1：GTGCCCGCGTCGCGACGTGTCTCCAAGC(6FAM)G(THE)(TAM)GACACCTTTGAGTGRAA‑CTaq2：GCCGATCCCTGTGCCCGCACCGCGGCG(Cy5)AA(THE)(BHQ2)TTCAGCAGGTGAA。利用本发明设计的引物，可以实现PRRSV的快速、准确的检测与分型。利用上述引物，若待测样品存在PRRSV，则检测样品出现扩增曲线，根据两个探针的起峰情况，可对PRRSV高致病毒株与经典株进行区分。若待测样品不存在PRRSV高致病毒株或经典株，检测样品检测不到相应的峰；本发明方法操作快速，具有特异性强，灵敏度高等特点。

公开(公告)号：CN119842937A

公开(公告)日：2025-04-18

申请号：CN202510084898.3

申请日：2025-02-21

Applicant: 海南省农业科学院畜牧兽医研究所

Inventor： 张艳 ,  薛琛璐 ,  刘海隆 ,  陈素贞 ,  董亚童 ,  魏立民 ,  刘圈炜 ,  晁哲

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明提供了一种鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合，包括检测的鸡毒支原体MG mgC2基因、鸡滑液囊支原体MS vlhA基因的特异性引物和探针；针对所述鸡毒支原体MG mgC2基因的特异性引物为SEQ ID NO.1‑2，探针为MG‑Taq；针对所述鸡滑液囊支原体MS vlhA基因的特异性引物为SEQ ID NO.3‑4，探针为MS‑Taq，还提供了鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR检测方法和应用，该方法具有高灵敏性、高特异性、操作简便的优点，为检测区分鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体提供有效的手段。