公开(公告)号：CN116143941B

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202211091990.5

申请日：2022-09-08

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 陶苏丹 ,  王洁琳 ,  游璇 ,  朱发明 ,  陈男英 ,  章伟

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/85 ,  G01N33/543 ,  G01N33/68 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明提供一种KIR3DL1‑IgG‑Fc融合重组蛋白、应用及试剂盒，并联合液相芯片技术平台实现了KIR3DL1与配基HLA‑I类分子相互作用的检测。本发明通过体外构建并获得KIR3DL1分子胞外结构域与人IgG‑Fc融合重组蛋白，再与商品化的偶联97种HLA‑I类分子的Luminex磁珠反应，通过Lumiex荧光仪检测KIR3DL1‑IgG‑Fc融合重组蛋白与不同磁珠反应的荧光值，从而判断3DL1分子与不同HLA分子表达的配基相互作用强度，实现了KIR与HLA分子高通量、高灵敏性和快速检测。KIR与HLA相互作用研究是免疫移植领域的热点和难点问题之一，本发明提供了KIR3DL1与配基HLA相互作用的快速检测的方案，这对今后选择和分析判断合适的造血干细胞供者具有重要的参考价值。

公开(公告)号：CN116555340A

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202310430147.3

申请日：2023-04-11

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 和艳敏 ,  何吉 ,  朱发明

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及基因编辑技术领域，尤其是涉及针对HLA‑I类分子的高效基因编辑方法及其试剂。本发明使用了一种基于CRISPR/Cas9技术的RNP方法针对HLA‑I类分子进行基因编辑，改变了以往传统的通过质粒DNA进行瞬时表达的方法，具有如下优势：①该方法可以有效缩短潜在的脱靶窗口期；②该方法省去了重组质粒构建的繁琐过程，大大节约了样品制备的时间，因此具有简单快速的优点；③该方法有助于HLA通用型细胞的制备，可以将该方法用于难转染的干细胞系统，总之，该方法为细胞治疗以及再生医学领域提供了全新的策略。

公开(公告)号：CN116287321A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310494551.7

申请日：2023-04-28

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 应燕玲 ,  洪小珍 ,  张晶晶 ,  朱发明

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6881 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其是涉及一种与免疫性溶血性输血反应相关的H血型系统抗原缺失的SNP位点、应用及试剂。本发明在先证者的FUT1基因中发现了两个可导致氨基酸残基突变的新的SNP突变位点和一个同义SNP突变，其中两个新错义突变位点的组合可引发溶血性输血反应。经过单倍型测序确认其中c.575G>C突变和c.289G>A突变分别位于一对等位基因上会导致氨基酸残基置换。基于此，本发明提供有关SNP位点组合及其分子检测试剂，有助于明确个体的H血型基因型，辅助其红细胞抗原和血清抗体的鉴定，可进一步提高输血安全、加强预防输血引发的溶血性输血反应。

公开(公告)号：CN116143941A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202211091990.5

申请日：2022-09-08

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 陶苏丹 ,  王洁琳 ,  游璇 ,  朱发明 ,  陈男英 ,  章伟

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/85 ,  G01N33/543 ,  G01N33/68 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明提供一种KIR3DL1‑IgG‑Fc融合重组蛋白、应用及试剂盒，并联合液相芯片技术平台实现了KIR3DL1与配基HLA‑I类分子相互作用的检测。本发明通过体外构建并获得KIR3DL1分子胞外结构域与人IgG‑Fc融合重组蛋白，再与商品化的偶联97种HLA‑I类分子的Luminex磁珠反应，通过Lumiex荧光仪检测KIR3DL1‑IgG‑Fc融合重组蛋白与不同磁珠反应的荧光值，从而判断3DL1分子与不同HLA分子表达的配基相互作用强度，实现了KIR与HLA分子高通量、高灵敏性和快速检测。KIR与HLA相互作用研究是免疫移植领域的热点和难点问题之一，本发明提供了KIR3DL1与配基HLA相互作用的快速检测的方案，这对今后选择和分析判断合适的造血干细胞供者具有重要的参考价值。

公开(公告)号：CN113943789A

公开(公告)日：2022-01-18

申请号：CN202111117473.6

申请日：2021-09-23

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 朱发明 ,  应燕玲 ,  张晶晶 ,  洪小珍 ,  何吉

IPC: C12Q1/6881 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供一种人红细胞血型抗原系统基因分型的多重PCR‑SBT方法、引物及试剂盒。所述多重PCR‑SBT方法对24个红细胞血型系统基因在同一多重扩增反应体系、反应程序和测序反应下进行分型，具体包括以下步骤：(1)制备人基因组DNA，作为PCR扩增的模板；(2)在同一PCR反应体系中，提供多对扩增引物，用聚合酶链反应多重扩增人基因组DNA中24个红细胞抗原系统的基因序列；(3)将步骤(2)得到的扩增产物进行双酶切纯化；(4)提供测序引物，将步骤(3)得到的纯化产物进行测序PCR反应；(5)将步骤(4)得到的测序产物进行醋酸钠‑乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；(6)将步骤(5)获得的序列通过软件分析，确定其基因型。

公开(公告)号：CN111218514A

公开(公告)日：2020-06-02

申请号：CN202010034652.2

申请日：2020-01-14

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 朱发明 ,  和艳敏 ,  洪小珍 ,  应燕玲 ,  许先国 ,  何吉

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明属于基因分型检测方法技术领域，具体涉及一种用于基于NGS技术的ABO基因全长序列测定方法。本发明还涉及一种基于NGS技术的ABO基因全长序列测定方法所用试剂。本发明所提供的方法对ABO基因全长序列包括5’UTR部分区域、第1号外显子至第7号外显子和全部内含子序列进行长片段PCR扩增、扩增产物文库制备、Illumina平台测序上机以及生物信息学分析。本发明所提供的试剂和方法可作为一种全新的、独立的、应用广泛的鉴定方法，解决了ABO精确分型的问题，发挥NGS技术对ABO基因分型高通量、结果准确的特点，在临床输血医学研究和遗传学等领域的相关应用将受到高度重视，对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。

公开(公告)号：CN110331193A

公开(公告)日：2019-10-15

申请号：CN201910632855.9

申请日：2019-07-14

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 和艳敏 ,  朱发明 ,  何吉 ,  陶苏丹 ,  陈晨 ,  章伟

IPC: C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于基因分型检测方法技术领域，具体涉及一种人类杀伤细胞免疫球蛋白受体KIR3DL2基因分型的PCR-SBT方法。本发明还涉及一种人类杀伤细胞免疫球蛋白受体KIR3DL2基因分型试剂。本发明所提供的试剂和方法可作为一种独立的、应用广泛的鉴定方法，解决了KIR3DL2精确分型的问题，发挥PCR-SBT对KIR3DL2分型操作简便、结果准确的特点，在临床输血医学研究和遗传学等领域的相关应用将受到高度重视，对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。

公开(公告)号：CN101921834B

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201010174588.4

申请日：2010-05-17

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 严力行 ,  朱发明 ,  许先国

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明提供一种用于ABO血型分型的PCR-SBT方法，它包括下述步骤：制备人基因组DNA；扩增ABO基因外显子1、外显子2-4、外显子5-7的片段；得到扩增产物进行双酶切纯化；将纯化产物进行测序PCR反应；将测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；将获得的序列通过软件分析，确定其基因型。本发明解决了ABO亚型的鉴定、疑难血型的判定、新突变位点的发现、基因之间的重组现象、基因多态性检测等问题，发挥PCR-SBT对ABO基因定型操作高通量，结果精确的特点，在临床输血医学研究和遗传学等领域的相关应用受到高度重视，对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。

公开(公告)号：CN118497328B

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202410940330.2

申请日：2024-07-15

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 朱发明 ,  应燕玲 ,  张晶晶 ,  洪小珍 ,  许先国 ,  黄新宇

IPC: C12Q1/6881 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种与免疫性溶血反应相关的Rhmod血型的SNP位点、应用及试剂盒，属于基因诊断技术领域。本发明在先证者的RHAG基因中发现其编码区起始密码子起的第500位c.500A>G突变，该突变位点是一种与红细胞溶血相关的RHAG血型系统血型基因的新的SNP突变位点，由此产生了RHAG血型系统的一种新的等位基因，可导致产生罕见的Rhmod表型，通过检测本发明的SNP位点有助于明确个体的RhAG血型基因型和Rh血型表型，辅助其红细胞抗原和血清抗体的鉴定，可进一步提高输血安全、加强预防输血引发的溶血性输血反应。

公开(公告)号：CN116411059B

公开(公告)日：2024-09-10

申请号：CN202310412594.6

申请日：2023-04-10

Applicant: 浙江省血液中心

Inventor： 朱发明 ,  应燕玲 ,  洪小珍 ,  张晶晶 ,  许先国 ,  黄新宇

IPC: C12Q1/6881 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其是涉及一种引发溶血性输血反应的类孟买表型的SNP位点、应用及试剂。本发明发现了一种可引发溶血性输血反应的H血型系统血型基因的新的SNP突变位点，产生了该血型系统的一种新的等位基因，可导致产生类孟买表型。提供有关SNP位点及其分子检测试剂，有助于明确个体的H血型基因型，可进一步提高输血安全。本发明还提供了前述SNP位点及等位基因的快速检测方法，从而提供了一种有效的避免溶血性输血反应发生的基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本发明所提供的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者以及献血者外周血进行H血型类孟买型FUT1基因突变位点的检测。