公开(公告)号：CN103275998B

公开(公告)日：2015-03-04

申请号：CN201310235337.6

申请日：2013-06-14

Applicant: 河北博伦特药业有限公司 ,  河北师范大学

Inventor： 李玮 ,  张金秀 ,  王立安 ,  李天云 ,  陈娇娇 ,  鞠建松 ,  薛张伟 ,  张琳琳 ,  张庆

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种具有编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段及其应用，对指孢囊菌（Dactylosporangiumsp.RH1）中反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶（GenBankID:BAA20094.1）基因密码子进行优化获得p4hyd基因，对优化后p4hyd基因进行截短，获得P4Hyd1-257基因，分别构建重组质粒pET-M-3C-P4Hyd和pET-M-3C-P4Hyd1-257，通过大肠杆菌进行原核表达，以菌体作酶源转化生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。实验结果表明，以L-脯氨酸为底物，相比于pET-M-3C-P4Hyd，pET-M-3C-P4Hyd1-257转化生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的最高转化率由91.4%提高到97.4%，转化反应时间由80小时缩短到60小时，转化率得到明显提高，转化时间明显缩短。本发明可用于生物转化法生产L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN103146720B

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201310064338.9

申请日：2013-03-01

Applicant: 河北博伦特药业有限公司 ,  河北师范大学

Inventor： 李玮 ,  鞠建松 ,  薛张伟 ,  张金秀 ,  王立安 ,  张琳琳 ,  李天云 ,  张庆 ,  陈娇娇

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因及其应用。通过优化指孢囊菌（Dactylosporangiumsp.RH1）中反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶（GenBankID:D78338.1）的核苷酸序列，构建优化基因的表达载体，通过原核表达，收集菌体作为转化反应的酶源，实验结果表明，以L-脯氨酸为底物，生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率高达91%。本发明可用于生物法生产反式-4-羟基-L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用价值。

公开(公告)号：CN103275998A

公开(公告)日：2013-09-04

申请号：CN201310235337.6

申请日：2013-06-14

Applicant: 河北博伦特药业有限公司 ,  河北师范大学

Inventor： 李玮 ,  张金秀 ,  王立安 ,  李天云 ,  陈娇娇 ,  鞠建松 ,  薛张伟 ,  张琳琳 ,  张庆

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种具有编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段及其应用，对指孢囊菌（Dactylosporangiumsp.RH1）中反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶（GenBankID:BAA20094.1）基因密码子进行优化获得p4hyd基因，对优化后p4hyd基因进行截短，获得P4Hyd1-257基因，分别构建重组质粒pET-M-3C-P4Hyd和pET-M-3C-P4Hyd1-257，通过大肠杆菌进行原核表达，以菌体作酶源转化生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。实验结果表明，以L-脯氨酸为底物，相比于pET-M-3C-P4Hyd，pET-M-3C-P4Hyd1-257转化生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的最高转化率由91.4%提高到97.4%，转化反应时间由80小时缩短到60小时，转化率得到明显提高，转化时间明显缩短。本发明可用于生物转化法生产L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN103911355B

公开(公告)日：2016-06-22

申请号：CN201410029052.1

申请日：2014-01-22

Applicant: 河北博伦特药业有限公司 ,  石家庄万尚医药科技有限公司 ,  河北师范大学

Inventor： 李玮 ,  张金秀 ,  薛张伟 ,  王立安 ,  李存会 ,  鞠建松 ,  李天云 ,  张琳琳 ,  陈娇娇 ,  张庆

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的高效转化方法，具体包括重组大肠杆菌工程菌中L-脯氨酸羟化酶高活性自诱导表达方法和将L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的高效转化体系中助剂的种类、浓度及转化条件，为建立生物转化法工业化生产反式-4-羟基-L-脯氨酸工艺提供了重要科学依据。

公开(公告)号：CN103911355A

公开(公告)日：2014-07-09

申请号：CN201410029052.1

申请日：2014-01-22

Applicant: 河北博伦特药业有限公司 ,  石家庄万尚医药科技有限公司 ,  河北师范大学

Inventor： 李玮 ,  张金秀 ,  薛张伟 ,  王立安 ,  李存会 ,  鞠建松 ,  李天云 ,  张琳琳 ,  陈娇娇 ,  张庆

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/0071 ,  C12N15/70 ,  C12P13/24 ,  C12Y114/11002

Abstract: 本发明公开了生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的高效转化方法，具体包括重组大肠杆菌工程菌中L-脯氨酸羟化酶高活性自诱导表达方法和将L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的高效转化体系中助剂的种类、浓度及转化条件，为建立生物转化法工业化生产反式-4-羟基-L-脯氨酸工艺提供了重要科学依据。

公开(公告)号：CN103146720A

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201310064338.9

申请日：2013-03-01

Applicant: 河北博伦特药业有限公司 ,  河北师范大学

Inventor： 李玮 ,  鞠建松 ,  薛张伟 ,  张金秀 ,  王立安 ,  张琳琳 ,  李天云 ,  张庆 ,  陈娇娇

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因及其应用。通过优化指孢囊菌（Dactylosporangiumsp.RH1）中反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶（GenBankID:D78338.1）的核苷酸序列，构建优化基因的表达载体，通过原核表达，收集菌体作为转化反应的酶源，实验结果表明，以L-脯氨酸为底物，生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率高达91%。本发明可用于生物法生产反式-4-羟基-L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用价值。