一种定位融合功能蛋白、底盘细胞及其用途

    公开(公告)号:CN119708262A

    公开(公告)日:2025-03-28

    申请号:CN202411950592.3

    申请日:2024-12-27

    Abstract: 本发明提供了一种定位融合功能蛋白、底盘细胞及其用途,属于生物医药技术领域;本发明首先构建了一种定位融合功能蛋白,并基于该定位融合功能蛋白构建了底盘细胞,所述底盘细胞可专一应用于重组小分子胶原蛋白的重复串联表达,可于蛋白分泌表达途径中完全去除连接串联单体的Kex2酶切识别位点双碱性氨基酸和用于提高Kex2识别切割效率于双碱性氨基酸前后添加的特定氨基酸,获得与天然人胶原蛋白序列100%一致的重组小分子胶原蛋白,在重复串联序列设计过程中,保证了Kex2酶切效率的同时使得引入的氨基酸非必须为胶原自身氨基酸,极大的提高了设计空间,具有很好的实用性。

    一种适用于重组胶原蛋白生产的毕赤酵母发酵培养基及发酵工艺

    公开(公告)号:CN117535164B

    公开(公告)日:2024-08-23

    申请号:CN202311495228.8

    申请日:2023-11-10

    Abstract: 本发明涉及一种适用于重组胶原蛋白生产的毕赤酵母发酵培养基及发酵工艺,属于生物发酵技术领域。本发明替换常用BSM培养中H3PO4、KOH,用更安全的无机盐取代,尽可能减少钾盐用量,用更安全的钠盐替代;采用本发明的培养基,并对种子液的OD值、接种量进行调整,采用优化后的甲醇流加工艺,发酵生产重组胶原蛋白,最终发酵液经钾离子检测仪测定钾离子浓度明显降低,使得产品更安全;本发明的发酵方法提高了蛋白表达量,同时减少了发酵过程中蛋白的降解;诱导周期由最初120h,缩短至52h,降低了发酵能耗成本,降低了发酵过程染菌风险;为企业创造了巨大经济价值。

    一种N-羟基琥珀酰亚胺残留量的检测方法

    公开(公告)号:CN117491522B

    公开(公告)日:2024-05-07

    申请号:CN202311456468.7

    申请日:2023-11-03

    Abstract: 本发明属于分析检测技术领域,具体涉及一种N‑羟基琥珀酰亚胺残留量的检测方法;采用色谱柱为Ultimate AQ‑C18,柱温为25‑35℃;流动相为磷酸水溶液;本发明针对小分子NHS极性大,优选了色谱柱,并结合控制柱温,提高了仪器使用效率,缩短了数据采集以及分析时间,提高了检测效率;同时创造性的选择磷酸水溶液为流动相,具备极性大、与NHS结合能力强、稳定性高的优势,而且其配制简单,洗脱更加方便。进一步结合优化流动相pH、流速、进样体积等参数,设计了针对NHS残留量检测的整体化方案,出峰时间合适、稳定,样品峰和溶剂峰分离度好,实现了高效、精准检测,检测精度可达10‑2ng/mL,应用前景广阔。

    一种重组人IV型胶原蛋白及其制备方法

    公开(公告)号:CN117801095A

    公开(公告)日:2024-04-02

    申请号:CN202311859408.X

    申请日:2023-12-30

    Abstract: 本发明涉及一种重组人IV型胶原蛋白及其制备方法,属于生物工程技术领域;本发明以人IV型胶原蛋白α2链中的部分序列为基础设计重组人IV型胶原蛋白,将蛋白编码DNA连接入表达载体中,构建重组表达载体;然后将其转化感受态大肠杆菌细胞,提取重组表达质粒;质粒线性化后转化工程菌株HCPB‑PPKEX2得到重组工程菌;培养,诱导表达目的蛋白并纯化、鉴定;进一步通过实验证明了本发明的胶原蛋白能够被Kex2、Ste13和CPB酶完全切割并高效分泌表达于胞外,并与理论序列完全一致;还通过实验验证了重组胶原蛋白的细胞黏附活性和促进细胞迁移活性;本发明的方案避免了外源蛋白残留的风险,同时也可以缩短后续纯化工艺流程的时间及成本,具有较高的安全性和应用价值。

    一种适用于重组胶原蛋白生产的毕赤酵母发酵培养基及发酵工艺

    公开(公告)号:CN117535164A

    公开(公告)日:2024-02-09

    申请号:CN202311495228.8

    申请日:2023-11-10

    Abstract: 本发明涉及一种适用于重组胶原蛋白生产的毕赤酵母发酵培养基及发酵工艺,属于生物发酵技术领域。本发明替换常用BSM培养中H3PO4、KOH,用更安全的无机盐取代,尽可能减少钾盐用量,用更安全的钠盐替代;采用本发明的培养基,并对种子液的OD值、接种量进行调整,采用优化后的甲醇流加工艺,发酵生产重组胶原蛋白,最终发酵液经钾离子检测仪测定钾离子浓度明显降低,使得产品更安全;本发明的发酵方法提高了蛋白表达量,同时减少了发酵过程中蛋白的降解;诱导周期由最初120h,缩短至52h,降低了发酵能耗成本,降低了发酵过程染菌风险;为企业创造了巨大经济价值。

    一种N-羟基琥珀酰亚胺残留量的检测方法

    公开(公告)号:CN117491522A

    公开(公告)日:2024-02-02

    申请号:CN202311456468.7

    申请日:2023-11-03

    Abstract: 本发明属于分析检测技术领域,具体涉及一种N‑羟基琥珀酰亚胺残留量的检测方法;采用色谱柱为Ultimate AQ‑C18,柱温为25‑35℃;流动相为磷酸水溶液;本发明针对小分子NHS极性大,优选了色谱柱,并结合控制柱温,提高了仪器使用效率,缩短了数据采集以及分析时间,提高了检测效率;同时创造性的选择磷酸水溶液为流动相,具备极性大、与NHS结合能力强、稳定性高的优势,而且其配制简单,洗脱更加方便。进一步结合优化流动相pH、流速、进样体积等参数,设计了针对NHS残留量检测的整体化方案,出峰时间合适、稳定,样品峰和溶剂峰分离度好,实现了高效、精准检测,检测精度可达10‑2ng/mL,应用前景广阔。

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