公开(公告)号：CN110004121B

公开(公告)日：2020-12-15

申请号：CN201910266761.4

申请日：2019-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  王武 ,  武迪 ,  杨海麟 ,  辛瑜

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12P33/02 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种胆固醇氧化酶及其应用，属于酶工程技术领域。本发明首先构建得到胆固醇氧化酶的基因工程菌E.coli BL21(DE3)‑pET20b(+)‑COD，其发酵所得的粗酶液中胆固醇氧化酶酶活高达700U·L‑1，纯化得到的胆固醇氧化酶比酶活为18.5U·mg‑1，其分子量约60,000kDa，该胆固醇氧化酶具有良好的温度耐受性和有机溶剂耐受性。利用工程菌发酵液制备胆甾‑4‑烯‑3‑酮和胆甾‑4‑烯‑3,6‑二酮，在有机相为甲苯的两相转化体系中，以胆固醇为底物制备胆甾‑4‑烯‑3‑酮的转化率为30％；制备胆甾‑4‑烯‑3,6‑二酮的转化率为45％。

公开(公告)号：CN111471737A

公开(公告)日：2020-07-31

申请号：CN202010337974.4

申请日：2020-04-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  王武 ,  杨海麟 ,  武迪

IPC: C12P33/02 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了伯克霍尔德菌转化制备甾醇衍生物的方法及应用，属于甾醇微生物转化技术领域。在向含有环糊精或其衍生物的反应体系中添加伯克霍尔德菌，能够使得产物转化得率由对照的0.1％～0.3％提高为12％～15％；且该方法在制备过程中无需添加有机溶剂，更加环保、经济、安全。

公开(公告)号：CN110004083B

公开(公告)日：2021-03-30

申请号：CN201910266228.8

申请日：2019-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  王武 ,  武迪 ,  杨海麟 ,  辛瑜 ,  孙柳青

IPC: C12N1/20 ,  C12N9/04 ,  C12P33/02 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一株洋葱伯克霍尔德菌及其应用，属于微生物领域。所述洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)ZWS15已于2017年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017661，保藏地址为中国武汉武汉大学。该菌能够以胆固醇为唯一碳源，并能在50℃生长，耐受10％的有机溶剂，利用其发酵获得的粗酶液中胆固醇氧化酶酶活高达200U/L。利用洋葱伯克霍尔德菌ZWS15发酵粗酶液在有机溶剂存在的两相系统中催化胆固醇，最终收集到胆甾‑4‑烯‑3‑酮的量约为底物添加量的5～11％，胆甾‑4‑烯‑3,6‑二酮的量约为底物添加量的10～15％。

公开(公告)号：CN110004121A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910266761.4

申请日：2019-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  王武 ,  武迪 ,  杨海麟 ,  辛瑜

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12P33/02 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种胆固醇氧化酶及其应用，属于酶工程技术领域。本发明首先构建得到胆固醇氧化酶的基因工程菌E.coli BL21(DE3)-pET20b(+)-COD，其发酵所得的粗酶液中胆固醇氧化酶酶活高达700U·L-1，纯化得到的胆固醇氧化酶比酶活为18.5U·mg-1，其分子量约60,000kDa，该胆固醇氧化酶具有良好的温度耐受性和有机溶剂耐受性。利用工程菌发酵液制备胆甾-4-烯-3-酮和胆甾-4-烯-3,6-二酮，在有机相为甲苯的两相转化体系中，以胆固醇为底物制备胆甾-4-烯-3-酮的转化率为30％；制备胆甾-4-烯-3,6-二酮的转化率为45％。

公开(公告)号：CN110004083A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910266228.8

申请日：2019-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  王武 ,  武迪 ,  杨海麟 ,  辛瑜 ,  孙柳青

IPC: C12N1/20 ,  C12N9/04 ,  C12P33/02 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一株洋葱伯克霍尔德菌及其应用，属于微生物领域。所述洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)ZWS15已于2017年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017661，保藏地址为中国武汉武汉大学。该菌能够以胆固醇为唯一碳源，并能在50℃生长，耐受10％的有机溶剂，利用其发酵获得的粗酶液中胆固醇氧化酶酶活高达200U/L。利用洋葱伯克霍尔德菌ZWS15发酵粗酶液在有机溶剂存在的两相系统中催化胆固醇，最终收集到胆甾-4-烯-3-酮的量约为底物添加量的5～11％，胆甾-4-烯-3,6-二酮的量约为底物添加量的10～15％。