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公开(公告)号：CN116286701A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310078769.4
申请日：2023-02-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种不透明红球菌L‑氨基酸氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明克服了野生型RoLAAO催化性能差的局限，通过麦芽糖蛋白工程及组合突变设计出突变体RoLAAOY226H/D227H/Y371L/A466C/W467A，其对五种选定底物催化效率为野生型的9.2‑82.8倍，能够以L‑氨基酸(L‑Leu、L‑Ile、L‑Met、L‑Val及L‑Phe)为底物规模化制备系列α‑酮酸(α‑酮亮氨酸、α‑酮异亮氨酸、α‑酮蛋氨酸、α‑酮缬氨酸及α‑苯丙酮酸)，对应产量>101g/L，转化率>95％，单位菌体生产α‑酮酸的能力在5.1‑5.5g/g，为多种α‑酮酸的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112626100A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011588760.0
申请日：2020-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高通量筛选α‑酮酸高产菌株方法，属于生物工程技术领域。本发明对来源于奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD进行蛋白质工程改造，并使用高通量筛选的方法，在96孔板中培养含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组菌株及菌株突变体，并进行转接诱导，离心收集含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的细胞来转化L‑氨基酸(L‑缬氨酸、L‑甲硫氨酸及L‑苯丙氨酸)生成其对应的α‑酮酸，并利用2,4‑二硝基苯肼显色后于520nm处读取吸光值，并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证，筛选得到α‑酮酸产量显著提高的菌株。
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公开(公告)号：CN117143839A
公开(公告)日：2023-12-01
申请号：CN202311020495.X
申请日：2023-08-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了甲基杆菌亚砜合成酶MpEgtB突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供饿了一种可以高效制备麦角硫因的甲基杆菌来源的亚砜合成酶MpEgtB突变体及其改造方法，并利用该突变体蛋白催化组氨酸三甲基内盐，以L‑Cys为硫供体直接转化为组氨酸三甲基内盐基半胱氨酸亚砜，以及进一步将得到的突变体与耻垢分枝杆菌来源的MsEgtD、MsEgtE偶联，以L‑His和L‑Met为底物制备L‑EGT。以最优突变体菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，在5L发酵罐下采用连续补料策略，转化48h，L‑EGT产量达到8.32g/L。该生产过程简单、杂质少，具有重要的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN116904416A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310870816.9
申请日：2023-07-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效生产四氢嘧啶的重组大肠杆菌及其构建方法，属于生物工程领域。本发明以大肠杆菌BL21为宿主，pET等系列质粒为载体，在胞内异源表达L‑二氨基丁酸转氨酶(EctBT15S/T49A/Y293M)、L‑二氨基丁酸乙酰转移酶(EctA)和四氢嘧啶合成酶(EctC)，通过质粒拷贝数优化得到最优表达载体及基因组合方式，并通过不同水平RBS调控三酶表达水平从而进一步优化体内三酶的酶活比例。以最优重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，四氢嘧啶最高产量达到87.36g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。
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