公开(公告)号：CN102120966A

公开(公告)日：2011-07-13

申请号：CN201010580120.5

申请日：2010-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 朱瑞宇 ,  金坚 ,  张大成 ,  许永利 ,  雷楗勇 ,  陈蕴

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/09 ,  C12N15/65 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一株乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶(ura3)缺陷型毕赤酵母(P.pastoris)X-33菌株的构建及利用，属于生物工程技术领域。该下程菌株P.pastoris X-33(Δura3)是通过采用同源重组敲除目的基因的方法而获得。该菌株可以利用URA3基因作为选择标记，构建各种工程菌株。而且，工程菌株构建时不要求载体携带的ura3基因来源于相同微生物种属。同时提供了一个对X33后续的工程化改造如糖基化改造提供了更好的平台菌株，具有非常大的潜在应用前景。

公开(公告)号：CN102120979A

公开(公告)日：2011-07-13

申请号：CN201010580240.5

申请日：2010-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 朱瑞宇 ,  金坚 ,  辛鑫 ,  张大成 ,  雷楗勇 ,  陈蕴

IPC: C12N1/38 ,  C12N1/19 ,  C12R1/85

Abstract: 本发明涉及一种新的提高重组蛋白的表达的方法。在正常重组毕赤酵母的工艺流程的基础上，加入微量的退黑激素可以大大提高重组蛋白的表达。该方法使得重组酵母菌高密度发酵时由于供氧不均衡等胁迫带来的酵母内部自由基积累得到降低，改善了高密度发酵过程中因自由基带来的对酵母本身的损伤，从而改善了酵母本身的生理状况。使用退黑激素后，重组蛋白的表达量得到了很大程度的提高。

公开(公告)号：CN102121024A

公开(公告)日：2011-07-13

申请号：CN201010580162.9

申请日：2010-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 朱瑞宇 ,  金坚 ,  辛鑫 ,  臧娴 ,  戴慧云 ,  张大成 ,  雷楗勇 ,  陈蕴

IPC: C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  C12N15/09 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 人血管内皮生长因子165b(hVEGF165b)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白及其制备技术的发明属于长效重组融合蛋白技术领域。本发明的融合蛋白包括与人血管内皮生长因子165b至少85％序列同源的第一区和与人血清白蛋白至少85％序列同源的第二区。利用限制性酶切连接的方法将hVEGF165b与HSA拼接，中间不加入任何连接肽。该融合蛋白可以在不改变融合蛋白特性的前提下，进行个别氨基酸残基的取代、缺失或加入，它们在保留了hVEGF165b活性的基础上，可望显著延长在体内的半衰期，是药学领域中，能够替代hVEGF165b的，有良好前景的药用融合蛋白。

公开(公告)号：CN102120967A

公开(公告)日：2011-07-13

申请号：CN201010580258.5

申请日：2010-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 金坚 ,  朱瑞宇 ,  张大成 ,  许永利 ,  雷楗勇 ,  陈蕴

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/09 ,  C12P21/02 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一株α-1，6甘露糖转移酶基因(och1)缺陷型毕赤酵母(P.pastoris)X-33菌株的构建及利用，属于生物工程技术领域。该工程菌株P.pastoris X-33(Δoch1)是通过采用双交换同源重组敲除目的基因的方法，用URA3基因作为选择标记，敲除P.pastoris X-33(Δura3)的α-1，6甘露糖转移酶基因(och1)，获得OCH1基因敲除的P.pastoris X-33(Δoch1)菌株。该菌株提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统，也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。具有非常大的潜在应用前景。