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公开(公告)号：CN115074304B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202210768607.9
申请日：2022-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种谷氨酸棒杆菌高效突变体及重组菌构建方法与应用，属于基因工程和诱变技术领域，基于筛选来源于C.glutamicum自身DNA复制过程中的DNA聚合酶，得到高度保守性的ExoI区域，并通过定点突变解除DNA聚合酶的校对、修复功能，提高突变率。基于筛选得到的DNA聚合酶突变体，逐步串联组装尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂UGI、胞嘧啶脱氨酶pmCDA1和腺嘌呤脱氨酶TadA‑ABE8e，构建一系列突变质粒MPs，该突变体在C.glutamicum中实现高效的突变率以及广泛的突变谱，且突变过程绿色、健康，没有有毒有害的物质参与，本发明构建的谷氨酸棒杆菌高效突变体系，可用于筛选高产谷氨酸底盘细胞，也为应用于其他氨基酸生产提供了重要借鉴。
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公开(公告)号：CN111534474A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010237129.X
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了重组枯草芽孢杆菌及其在生产ε-聚赖氨酸中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种可高效转化L-赖氨酸生产ε-聚赖氨酸的重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5-pls，将此重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5-pls添加至含有L-赖氨酸的反应体系中反应4h，即可使反应液中ε-聚赖氨酸的产量以及转化率分别高达195.1mg/L和17.4％，因此，利用此重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5-pls生产ε-聚赖氨酸具有生产周期短、产量高的优势。
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公开(公告)号：CN114990045B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202210768627.6
申请日：2022-06-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/31 , C12N9/88 , C12N9/12 , C07K14/245 , C12P13/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种重组大肠杆菌及其构建方法与合成1,5‑戊二胺的方法，属于基因工程技术领域，该重组大肠杆菌含有催化L‑赖氨酸生成1,5‑戊二胺的赖氨酸脱羧酶最优突变体CadAP530L/M569V、促进底物/产物进/出细胞的赖氨酸/尸胺反向转运蛋白CadB以及提供辅因子PLP自供应吡哆醛激酶I和II，将该重组大肠杆菌作为催化剂，得到的高产量的1,5‑戊二胺，摩尔转化率高达98.67％。本发明提供的合成1,5‑戊二胺的方法，该方法以重组大肠杆菌作为催化剂，不需要额外添加辅因子PLP，不使用缓冲液(无需调节pH)，无需使用盐酸进行中和，合成转化1,5‑戊二胺的时间短，生产成本低，为1,5‑戊二胺的工业化生产提供了一种高效且经济的方法。
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公开(公告)号：CN111534474B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202010237129.X
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了重组枯草芽孢杆菌及其在生产ε‑聚赖氨酸中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种可高效转化L‑赖氨酸生产ε‑聚赖氨酸的重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5‑pls，将此重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5‑pls添加至含有L‑赖氨酸的反应体系中反应4h，即可使反应液中ε‑聚赖氨酸的产量以及转化率分别高达195.1mg/L和17.4％，因此，利用此重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5‑pls生产ε‑聚赖氨酸具有生产周期短、产量高的优势。
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公开(公告)号：CN111394291B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202010227468.X
申请日：2020-03-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌发酵生产L‑谷氨酸的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种可低产L‑丙氨酸、L‑酪氨酸、L‑缬氨酸、L‑胱氨酸和L‑甲硫氨酸等副产物的重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum G01/pXMJ19‑cg2115，将此菌株接种至5‑L发酵罐中发酵48h所获得的发酵液中L‑丙氨酸、L‑酪氨酸、L‑缬氨酸、L‑胱氨酸和L‑甲硫氨酸的含量分别仅有0.15g/L、0.185g/L、0.369g/L、0.02g/L和0.277g/L，分别较野生型谷氨酸棒杆菌G01降低了98.1％、96.1％、86.1％、99.4％和91.4％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113234620A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110388080.2
申请日：2021-04-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株基于ARTP筛选获得的谷氨酰胺转氨酶高产突变株，属于微生物诱变育种领域。本发明所述茂源链霉菌Streptomyces sp.MTG‑7是以茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis DB13为出发菌株，经常温常压等离子诱变筛选获得的。本发明所述茂源链霉菌MTG‑7在摇瓶水平上发酵84h，谷氨酰胺转氨酶酶活可达25U/mL，5L发酵罐发酵42h，谷氨酰胺转氨酶酶活高达80U/mL，最适温度和pH分别为50℃和7.0，且在pH 6.0‑8.0范围内仍保留90％以上的酶活，具有较好的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN110438097B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201910750086.2
申请日：2019-08-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性与酶活提高的L‑异亮氨酸羟化酶突变体，具体公开了一种热稳定性与酶活提高的L‑异亮氨酸羟化酶突变体及其在4‑羟基异亮氨酸生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明提出的提高热稳定性的方法可用于其他羟化酶的改造，为生产其他高附加值羟化氨基酸提供了理论指导。利用本发明的的枯草芽孢杆菌工程菌生产得到的L‑异亮氨酸羟化酶的比酶活可达2.4±0.08U/mg，全细胞重复5批次，连续转化45h，可以得到856.91mM(126.1g/L)的4‑HIL，且5批次后，L‑异亮氨酸羟化酶的转化能力仍为第一次转化的84.1％。
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公开(公告)号：CN118086268A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410140885.9
申请日：2024-02-01
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一步法高效催化乳糖生产塔格糖工程菌株的构建及其应用，属于基因工程技术和合成生物学领域。本发明提供的谷氨酸棒杆菌含催化乳糖生成葡萄糖和D‑半乳糖的β‑半乳糖苷酶和催化D‑半乳糖生成D‑塔格糖的阿拉伯糖异构酶的最优突变体。以本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌全细胞作为催化剂，在5L发酵罐水平优化发酵及转化条件，以15mM CaCl2作为反应液，添加0.5mM Mn2+，投加500g/L乳糖，48h后可得到110g/L的D‑塔格糖，转化率达到22％，全程无需控制pH，为D‑塔格糖的工业化生产提供了一种安全高效且经济的方法。
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公开(公告)号：CN117384874A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311142772.4
申请日：2023-09-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用微生物高效制备α‑酮异己酸的方法，属于分子生物技术与酶工程技术领域。本发明的改造方法通过pmLAAD的蛋白质改造，通过分析pmLAAD膜结合疏水插入序列结构，并设计了增强膜蛋白LAAD与膜之间的相互作用的突变体，克服了之前野生型酶催化效率低的问题，并通过实验验证。最后，对转化体系的催化剂浓度、缓冲液种类、pH和温度行了优化。最终得到最佳突变体pmLAAD在最优条件下，48h时α‑酮异己酸的产量可达到110.01g/L，转化率>90％。本发明的方法可以大大降低成本，加快了酶转化法生产α‑酮异己酸的工业化进程。
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公开(公告)号：CN113234620B
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202110388080.2
申请日：2021-04-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株基于ARTP筛选获得的谷氨酰胺转氨酶高产突变株，属于微生物诱变育种领域。本发明所述茂源链霉菌Streptomyces sp.MTG‑7是以茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis DB13为出发菌株，经常温常压等离子诱变筛选获得的。本发明所述茂源链霉菌MTG‑7在摇瓶水平上发酵84h，谷氨酰胺转氨酶酶活可达25U/mL，5L发酵罐发酵42h，谷氨酰胺转氨酶酶活高达80U/mL，最适温度和pH分别为50℃和7.0，且在pH 6.0‑8.0范围内仍保留90％以上的酶活，具有较好的工业应用潜力。
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