公开(公告)号：CN106868155B

公开(公告)日：2020-03-10

申请号：CN201710154441.0

申请日：2017-03-15

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  刘奕侬 ,  王少儒 ,  田沺 ,  张小娥 ,  黄俊捷 ,  杨伊文 ,  朱子睿

IPC: C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测miRNA的方法。本发明方法包含三部分，第一部分引物的产生，发卡探针I被靶标miRNA打开后，被核酸外切酶I降解单链部分，而后核糖核酸酶H降解DNA：RNA杂合链中的RNA，留下一段短链DNA；第二部分是树状滚环扩增，上一步产生的单链DNA连接长单链DNA探针成环作为模板，然后以该单链DNA为引物进行一级滚环扩增，在滚环扩增体系中引入的发卡茎环结构II，被一级滚环扩增产物打开，从而多级树枝状滚环扩增；第三部分是根据滚环扩增产物中含有的G‑四链体进行检测。本发明是一种灵敏、经济、方便、原位的可视化检测miRNA的方法。

公开(公告)号：CN106868155A

公开(公告)日：2017-06-20

申请号：CN201710154441.0

申请日：2017-03-15

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  刘奕侬 ,  王少儒 ,  田沺 ,  张小娥 ,  黄俊捷 ,  杨伊文 ,  朱子睿

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测miRNA的方法。本发明方法包含三部分，第一部分引物的产生，发卡探针I被靶标miRNA打开后，被核酸外切酶I降解单链部分，而后核糖核酸酶 H降解DNA：RNA杂合链中的RNA，留下一段短链DNA；第二部分是树状滚环扩增，上一步产生的单链DNA连接长单链DNA探针成环作为模板，然后以该单链DNA为引物进行一级滚环扩增，在滚环扩增体系中引入的发卡茎环结构II，被一级滚环扩增产物打开，从而多级树枝状滚环扩增；第三部分是根据滚环扩增产物中含有的G‑四链体进行检测。本发明是一种灵敏、经济、方便、原位的可视化检测miRNA的方法。

公开(公告)号：CN118146274A

公开(公告)日：2024-06-07

申请号：CN202410327903.4

申请日：2024-03-19

Applicant: 武汉大学

Inventor： 陈才友 ,  万子龙 ,  张小娥 ,  雷一凡

IPC: C07F17/02 ,  B01J31/24 ,  C07C2/86 ,  C07C15/50 ,  C07B53/00 ,  C07C15/48 ,  C07C29/34 ,  C07C33/24 ,  C07C41/30 ,  C07C43/215 ,  C07C17/263 ,  C07C25/24 ,  C07C22/08 ,  C07C22/04 ,  C07D333/08 ,  C07C41/48 ,  C07C43/303 ,  C07D211/16 ,  C07F7/18 ,  C07C269/06 ,  C07C271/12

Abstract: 本发明属于有机合成和催化领域，公开了一种具有面手性及膦手性的PNN三齿配体及其在自由基不对称官能团化及相关反应中的应用。所述具有面手性及膦手性的磷氮氮(PNN)三齿配体基于二茂铁骨架，具有通式Ⅰ所示的结构。该PNN三齿配体具有独特的结构和性质，能显著提高自由基不对称官能团化等反应的催化效率和立体选择性。所述具有面手性及膦手性的PNN三齿配体能够用于催化烷基卤代物的自由基不对称官能团化反应，尤其是用于不对称Sonogashira交叉偶联反应。#imgabs0#

公开(公告)号：CN106834508A

公开(公告)日：2017-06-13

申请号：CN201710162311.1

申请日：2017-03-17

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  刘奕侬 ,  王少儒 ,  田沺 ,  张小娥 ,  黄俊捷 ,  杨伊文

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/682 ,  C12Q2525/207 ,  C12Q2531/125 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2533/107

Abstract: 本发明公开了一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法，属于分子生物学和核酸化学领域。本发明方法主要由三部分组成；第一部分是5'端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用SplintR连接酶连接成环；第二部分是超分支滚环扩增，锁式探针成环后作为模板、靶标miRNA作为引物，在phi29 DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过引入二级引物，使线性滚环扩增沿着支链方向发展，达到信号进一步放大；第三部分是往滚环扩增产物中加入SYBR GREEN I染料进行检测。本发明操作简单、成本较低、体系单一、灵敏度高、无背景荧光信号干扰，适于复杂生物环境中miRNA的检测。

公开(公告)号：CN105112411A

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201510530744.9

申请日：2015-08-26

Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 ,  武汉大学

Inventor： 周翔 ,  王少儒 ,  张小娥

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种基于核酸外切酶的microRNA多色检测探针及检测方法。本发明检测探针为发卡结构的DNA，包含三个部分：茎末端区、loop环状区和5'、3'末端标记的荧光基团、淬灭基团；环状区包含待测miRNA的互补序列。没靶标miRNA时发卡结构稳定，荧光基团和淬灭基团彼此靠近，荧光被淬灭；靶标miRNA存在时，环结构与靶标结合后发卡结构打开形成DNA-RNA杂合体，5'与3'端部分裸露出来，露出来的单链DNA的3'端能被核酸外切酶识别降解，淬灭基团从杂合体中脱落从而使荧光恢复。根据检测标靶的不同设计相对应的探针，并且标记不同的荧光基团淬灭基团对，能实现多种miRNAs的同时检测。