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公开(公告)号：CN111849981A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010671855.2
申请日：2020-07-13
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种基于PLIN1基因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示。本发明还公开了扩增该sgRNA序列的引物对、基于PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体及其应用。本发明的构建了控制猪PLIN1基因表达的载体及验证其相应的敲除效率。本发明还提供三种用于控制猪PLIN1表达的载体并验证其敲除效率并选出一种最优敲除载体，通过所述载体能够控制猪细胞中的PLIN1表达量，进而控制猪的肌肉的纤维组成，调节瘦肉率的变化。本发明还验证了该PLIN1基因敲除后的线粒体活性氧含量有所升高、线粒体膜电位检测升高、ATP含量降低、细胞周期发生阻滞，而细胞凋亡率大大降低。
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公开(公告)号：CN111849981B
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202010671855.2
申请日：2020-07-13
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种基于PLIN1基因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示。本发明还公开了扩增该sgRNA序列的引物对、基于PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体及其应用。本发明的构建了控制猪PLIN1基因表达的载体及验证其相应的敲除效率。本发明还提供三种用于控制猪PLIN1表达的载体并验证其敲除效率并选出一种最优敲除载体，通过所述载体能够控制猪细胞中的PLIN1表达量，进而控制猪的肌肉的纤维组成，调节瘦肉率的变化。本发明还验证了该PLIN1基因敲除后的线粒体活性氧含量有所升高、线粒体膜电位检测升高、ATP含量降低、细胞周期发生阻滞，而细胞凋亡率大大降低。
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公开(公告)号：CN102978202A
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201210383179.4
申请日：2012-10-10
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 , 扬州大学
Abstract: 本发明为一种猪骨骼肌中特异过表达猪内源IGF1(C1：Ea)基因的安全型表达载体。该载体包含猪内源性序列sk-α-actinPromoter/IGF1(C1:Ea)/sk-α-actin3’UTR/SV40增强子串联组成的表达盒。本发明的表达载体在细胞水平上验证了骨骼肌特异sk-α-actin启动子在成肌细胞中能高效表达，在具有成肌分化潜能的PEF细胞中仅低水平表达而在其他类型细胞中不表达。本发明中构建的载体制备转基因小鼠，通过定量PCR和WesternBlot检测出转基因小鼠骨骼肌中IGF1基因的mRNA和蛋白表达水平分别为野生型小鼠的15倍和3.5倍，并且仅在骨骼肌中高效表达。
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公开(公告)号：CN113980999A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202110084936.7
申请日：2021-01-21
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了pCMV‑Cas9‑4xsgRNA表达载体，所述表达载体包含Cas9蛋白、EGFP标记和4个表达sgRNA功能域的表达载体。本发明还公开了基于多位点同时敲除的CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用。该载体整合了Cas9表达框和四个可以通过不同限制性内切酶酶切重组的sgRNA，能够高效简便地在众多真核生物细胞中实现至多四个sgRNA同时发挥作用，实现两个基因四个靶点的敲除或同时敲除四个基因四个靶点。
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公开(公告)号：CN104560996A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201410826215.9
申请日：2014-12-25
Applicant: 扬州大学
Inventor： 鞠辉明
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , A61K48/00
Abstract: 本发明公开了一种抑制小鼠GH基因表达的shRNA的载体，其特征在于：所述shRNA包括分别与GH mRNA序列特异性结合在340位点的GH-mus-340、544位点的GH-mus-544、616位点的GH-mus-616和627位点的GH-mus-627；所述GH-mus-340、GH-mus-544、GH-mus-616、GH-mus-627的DNA模板包括siRNA正义链模板的核苷酸序列，loop环的核苷酸序列，siRNA反义链模板的核苷酸序列和终止信号的核苷酸序列。本发明能有效抑制小鼠GH基因表达，且4个GH shRNA过表达载体均具有很高的表达效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117441669A
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202310970713.X
申请日：2023-08-03
Applicant: 扬州大学广陵学院
IPC: A01K67/02
Abstract: 本发明公开了动物科学技术领域的一种通过轻度自噬提高小鼠肌肉分化能力的饲养方法，采用小鼠纯化维持饲料喂养42‑45日龄清洁级c57BL/6雌性小鼠，进行适应性饲养2周后，按平均采食量的70%采用纯化维持饲料喂养2‑3周后，得到实验用成品小鼠。本发明按平均采食量的70%采用纯化维持饲料喂养时，可以利用更少的饲料获得更好的肌肉品质。发明提供的饲养方法简便，易于操作，易控制。采用本发明所述的促进小鼠肌肉分化的方法，能够极大的节约饲养成本并且获得更为优质的肉质产品。对家畜禽饲养业具有指导意义。
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公开(公告)号：CN112011502A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010940072.X
申请日：2020-09-09
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/077
Abstract: 本发明公开了一种猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，包括以下步骤：将猪骨骼肌肉组织块依次用II型胶原酶溶液和胰蛋白酶消化后过筛，固液分离得到沉淀物；将沉淀物制成细胞悬液采用差速贴壁纯化培养，直到细胞密度达到70%及以上，用胰酶消化，用完全培养基终止消化离心，弃去上清液加入培养基重悬后进行传代培养；骨骼肌卫星细胞的鉴定：对传代培养的骨骼肌卫星细胞进行PAX7和MyoD基因免疫荧光染色鉴定，显示都呈阳性表达，且与DAPI染色的的细胞核完全重叠表明分离的细胞为骨骼肌卫星细胞。本发明的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法操作简便、获得细胞数量多，而且细胞纯度高，为猪骨骼肌的生长发育研究提供材料。
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公开(公告)号：CN104560996B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201410826215.9
申请日：2014-12-25
Applicant: 扬州大学
Inventor： 鞠辉明
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , A61K48/00
Abstract: 本发明公开了一种抑制小鼠GH基因表达的shRNA的载体，其特征在于：所述shRNA包括分别与GH mRNA序列特异性结合在340位点的GH‑mus‑340、544位点的GH‑mus‑544、616位点的GH‑mus‑616和627位点的GH‑mus‑627；所述GH‑mus‑340、GH‑mus‑544、GH‑mus‑616、GH‑mus‑627的DNA模板包括siRNA正义链模板的核苷酸序列，loop环的核苷酸序列，siRNA反义链模板的核苷酸序列和终止信号的核苷酸序列。本发明能有效抑制小鼠GH基因表达，且4个GH shRNA过表达载体均具有很高的表达效率。
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公开(公告)号：CN103045598A
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201310022086.3
申请日：2013-01-21
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种生产猪microRNA-378的方法及其专用DNA片段。该DNA片段如SEQIDNO.1所示。含有上述DNA片段的重组载体pSingle-tTS-microRNA-378也属于本发明的保护范围之内。具体地，上述重组载体是将pSingle-tTS载体的多克隆位点插入有SEQ ID NO.1所示片段上述的猪microRNA-378前体DNA片段插入pSingle-tTS的XhoΙ位点构成的重组表达载体。将重组载体转化到细胞系中，用强力霉素诱导表达生产猪microRNA-378；和正常组细胞内microRNA-378表达相比，经诱导底物诱导后microRNA-378表达效率显著提高，各组间相差极显著（p＜0.01）。
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