公开(公告)号：CN111849981A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN202010671855.2

申请日：2020-07-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 彭玥晗 ,  鞠辉明

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种基于PLIN1基因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示。本发明还公开了扩增该sgRNA序列的引物对、基于PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体及其应用。本发明的构建了控制猪PLIN1基因表达的载体及验证其相应的敲除效率。本发明还提供三种用于控制猪PLIN1表达的载体并验证其敲除效率并选出一种最优敲除载体，通过所述载体能够控制猪细胞中的PLIN1表达量，进而控制猪的肌肉的纤维组成，调节瘦肉率的变化。本发明还验证了该PLIN1基因敲除后的线粒体活性氧含量有所升高、线粒体膜电位检测升高、ATP含量降低、细胞周期发生阻滞，而细胞凋亡率大大降低。

公开(公告)号：CN111849981B

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN202010671855.2

申请日：2020-07-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 彭玥晗 ,  鞠辉明

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种基于PLIN1基因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示。本发明还公开了扩增该sgRNA序列的引物对、基于PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体及其应用。本发明的构建了控制猪PLIN1基因表达的载体及验证其相应的敲除效率。本发明还提供三种用于控制猪PLIN1表达的载体并验证其敲除效率并选出一种最优敲除载体，通过所述载体能够控制猪细胞中的PLIN1表达量，进而控制猪的肌肉的纤维组成，调节瘦肉率的变化。本发明还验证了该PLIN1基因敲除后的线粒体活性氧含量有所升高、线粒体膜电位检测升高、ATP含量降低、细胞周期发生阻滞，而细胞凋亡率大大降低。