公开(公告)号：CN114437186A

公开(公告)日：2022-05-06

申请号：CN202210058991.3

申请日：2022-01-19

Applicant: 安徽大学

Inventor： 葛宏华 ,  吴升刚 ,  张楠楠 ,  张萍萍 ,  何永兴 ,  肖忠 ,  朱先峰 ,  李杰 ,  廖辰

IPC: C07K14/21 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N15/78 ,  C12N15/70 ,  C12P17/16 ,  C12R1/39 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种PhlH蛋白突变体及其在提高莫匹罗星产量中的应用，涉及基因工程技术领域，所述突变体为PhlH蛋白序列的第190位氨基酸由缬氨酸突变为丙氨酸制备获得。本发明通过定点突变改变了PhlH蛋白的活性，使代谢中的CoA尽可能的转向聚酮化合物莫匹罗星，从而获得了莫匹罗星更高产量的突变菌株，具备较高的应用价值。

公开(公告)号：CN111088243B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201911308023.8

申请日：2019-12-18

Applicant: 安徽大学

Inventor： 葛宏华 ,  胡馨益 ,  张楠楠 ,  张鹤 ,  陈亚南 ,  后少俊 ,  王方方 ,  魏维 ,  吴亦凡

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种氨肽酶LapA定点突变蛋白及其应用，属于蛋白质工程技术领域，本发明基于对LapA结构的研究结果，发现了影响LapA底物识别性的关键位点，通过对LapA突变蛋白的研究，利用定点突变技术，获得了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的嗜肺军团菌氨肽酶LapA的第386位突变体蛋白，经过突变的蛋白不仅保留了原蛋白的水解作用，还对N末端为赖氨酸的蛋白质和多肽具有水解作用，扩展了LapA底物识别的范围，为氨肽酶LapA的产业化和应用广泛化奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN114437186B

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202210058991.3

申请日：2022-01-19

Applicant: 安徽大学

Inventor： 葛宏华 ,  吴升刚 ,  张楠楠 ,  张萍萍 ,  何永兴 ,  肖忠 ,  朱先峰 ,  李杰 ,  廖辰

IPC: C07K14/21 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N15/78 ,  C12N15/70 ,  C12P17/16 ,  C12R1/39 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种PhlH蛋白突变体及其在提高莫匹罗星产量中的应用，涉及基因工程技术领域，所述突变体为PhlH蛋白序列的第190位氨基酸由缬氨酸突变为丙氨酸制备获得。本发明通过定点突变改变了PhlH蛋白的活性，使代谢中的CoA尽可能的转向聚酮化合物莫匹罗星，从而获得了莫匹罗星更高产量的突变菌株，具备较高的应用价值。

公开(公告)号：CN115838403A

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN202211332685.0

申请日：2022-10-28

Applicant: 安徽大学

Inventor： 葛宏华 ,  朱先峰 ,  张楠楠 ,  李杰 ,  郭天鸽 ,  王欢欢

IPC: C07K14/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12P7/26 ,  C12R1/19 ,  C12R1/39

Abstract: 本发明公开了一种PhlH蛋白突变体及其在高产2，4‑二乙酰基间苯三酚中的应用，涉及基因工程技术领域，所述突变体为PhlH蛋白序列的第144位氨基酸由赖氨酸突变为丙氨酸制备获得。本发明是通过在荧光假单胞菌2P24的phlH基因缺失菌株中，重新整合了phlH点突基因phlH/K144A，以减弱PhlH蛋白对2,4‑DAPG生物合成的负反馈调节，可显著提升2，4‑二乙酰基间苯三酚的合成水平。本发明可进一步应用于工业化的生产，改变目前2，4‑DAPG低产的现状。

公开(公告)号：CN109161539A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201811087825.6

申请日：2018-09-18

Applicant: 安徽大学

Inventor： 张楠楠 ,  胡馨益 ,  葛宏华

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/37 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种有机溶剂耐受性氨肽酶LapA及其制备方法和应用，属于基因工程、蛋白表达与纯化及酶学特征研究领域，该氨肽酶LapA来源于嗜肺军团菌，具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，该编码基因具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。该酶作为一种外切蛋白酶，具有良好的温度稳定性以及有机溶剂耐受性，能适应极端的高浓度有机溶剂反应条件，为氨肽酶LapA的产业化和在发酵食品加工工业的应用奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN114349830B

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202111541422.6

申请日：2021-12-16

Applicant: 安徽大学

Inventor： 张楠楠 ,  汪军 ,  朱先峰 ,  李杰 ,  葛宏华 ,  何永兴 ,  张萍萍

IPC: C07K14/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12P7/22 ,  C12R1/19 ,  C12R1/39

Abstract: 本发明公开了一种PhlH蛋白突变体及其在提高2,4‑二乙酰基间苯三酚产量中的应用，涉及基因工程技术领域，所述突变体为PhlH蛋白序列的第124位氨基酸由精氨酸突变为丙氨酸制备获得。本发明通过与2,4‑DAPG识别和结合的PhlH蛋白氨基酸残基产生R124A定点突变，以减弱PhlH蛋白对2,4‑DAPG生物合成的负反馈调节，获得2,4‑DAPG产量的提升。

公开(公告)号：CN114349830A

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202111541422.6

申请日：2021-12-16

Applicant: 安徽大学

Inventor： 张楠楠 ,  汪军 ,  朱先峰 ,  李杰 ,  葛宏华 ,  何永兴 ,  张萍萍

IPC: C07K14/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12P7/22 ,  C12R1/19 ,  C12R1/39

Abstract: 本发明公开了一种PhlH蛋白突变体及其在提高2,4‑二乙酰基间苯三酚产量中的应用，涉及基因工程技术领域，所述突变体为PhlH蛋白序列的第124位氨基酸由精氨酸突变为丙氨酸制备获得。本发明通过与2,4‑DAPG识别和结合的PhlH蛋白氨基酸残基产生R124A定点突变，以减弱PhlH蛋白对2,4‑DAPG生物合成的负反馈调节，获得2,4‑DAPG产量的提升。

公开(公告)号：CN109161539B

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN201811087825.6

申请日：2018-09-18

Applicant: 安徽大学

Inventor： 张楠楠 ,  胡馨益 ,  葛宏华

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/37 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种有机溶剂耐受性氨肽酶LapA及其制备方法和应用，属于基因工程、蛋白表达与纯化及酶学特征研究领域，该氨肽酶LapA来源于嗜肺军团菌，具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，该编码基因具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。该酶作为一种外切蛋白酶，具有良好的温度稳定性以及有机溶剂耐受性，能适应极端的高浓度有机溶剂反应条件，为氨肽酶LapA的产业化和在发酵食品加工工业的应用奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN117987445A

公开(公告)日：2024-05-07

申请号：CN202410072195.4

申请日：2024-01-18

Applicant: 安徽大学

Inventor： 张楠楠 ,  孙燕霞 ,  葛宏华 ,  李杰 ,  聂梦雪 ,  屠心悦 ,  陶炫颖 ,  张萍萍 ,  何永兴 ,  王华丙

IPC: C12N15/78 ,  C12N15/31 ,  C07K14/21 ,  C12R1/39

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体的，本发明涉及一种荧光假单胞菌高丝氨酸内酯受体的表达和纯化方法。本发明通过构建不同的表达质粒，通过筛选分析，结果显示含中低拷贝BBR 1复制子的表达质粒及高丝氨酸内酯受体编码基因自身启动子驱动的表达质粒能获得更高活性的高丝氨酸内酯受体，且无需诱导剂诱导；随后通过离子交换层析和分子排阻层析，获得了纯度高的蛋白，凝胶阻滞实验表明通过该方法纯化的高丝氨酸内酯受体能很好的与其靶探针结合。本发明提供的这种方法可以解决高丝氨酸内酯受体在大肠杆菌中包涵体表达的问题，为细菌群体感应抑制剂筛选、开展高丝氨酸内酯受体结构研究提供物质基础。

公开(公告)号：CN117025639A

公开(公告)日：2023-11-10

申请号：CN202311170521.7

申请日：2023-09-12

Applicant: 安徽大学

Inventor： 张楠楠 ,  屠心悦 ,  葛宏华 ,  李杰 ,  孙燕霞 ,  陶炫颖 ,  陈思雨

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12P7/26 ,  C12R1/39

Abstract: 本发明公开了一种phlI基因及其在提高2,4‑二乙酰基间苯三酚产量中的应用，涉及基因工程技术领域，所述phlI基因正调控2,4‑DAPG合成，该基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述phlI基因过表达或敲除后回补提高2,4‑二乙酰基间苯三酚产量。本发明通过在敲除菌株ΔphlI和野生菌株2P24中导入pBBR5‑phlI质粒，回补和过表达phlI基因，验证2,4‑DAPG基因簇上基因phlI的功能，获得2,4‑DAPG产量的提升。