公开(公告)号：CN115851686A

公开(公告)日：2023-03-28

申请号：CN202210906268.6

申请日：2022-07-29

Applicant: 复旦大学附属中山医院

Inventor： 李华 ,  李鹏 ,  吴娜 ,  葛均波

IPC: C12N9/80 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C07K1/107 ,  C12P21/06 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明提供了一种SIRT6H133Y蛋白及其富集豆蔻酰化修饰肽段的方法和应用，蛋白制备方法包括：以SIRT6‑FLAG为模板得到SIRT6‑FLAG片段，以pET28a质粒为模板得到质粒片段，两片段拼接得到表达质粒pET28TEV‑SIRT6，以其为模板进行PCR定点突变技术，得到过表达质粒pET28TEV‑SIRT6H133Y，转入大肠杆菌内纯化蛋白；本发明基于SIRT6H133Y蛋白对豆蔻酰基的结合力，并通过SIRT6H133Y蛋白上的His‑tag和Flag‑tag标签对豆蔻酰化修饰肽段进行免疫共沉淀，富集得到豆蔻酰化修饰肽段，质谱检测分析得到豆蔻酰化修饰靶蛋白和修饰位点。