公开(公告)号：CN110438210A

公开(公告)日：2019-11-12

申请号：CN201910745351.8

申请日：2019-08-13

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈红岩 ,  陈弘远

IPC: C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及非小细胞肺癌靶向药物相关低频突变的多重富集检测方法，本发明以人类EGFR基因外显子19上的缺失突变中频率最高的2235_2249del-15，2236_2250del-15、外显子20上的T790M突变和外显子21上的L858R突变这四个突变作为靶标，针对每个突变位点分别设计引物、阻抑子和标记不同荧光的TaqMan探针，通过采集扩增过程中的荧光信号绘制扩增曲线，将扩增曲线的Cq值与标准曲线确定的阈值进行比较，判断样品是否存在对应突变。本发明体系针对cfDNA进行优化，使得体系能够在模板片段化程度高、野生型背景强的情况下，对目标序列实现扩增和检测。该方法兼具灵敏和多重的特点，使检测操作更为方便、快捷和准确，具有较大的应用价值。

公开(公告)号：CN106957902A

公开(公告)日：2017-07-18

申请号：CN201610940206.1

申请日：2016-11-01

Applicant: 复旦大学

Inventor： 卢大儒 ,  陈红岩 ,  陈弘远 ,  丁嘉琦 ,  王超

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一组用于检测药物性耳聋相关位点的非标记探针。分别针对两个位点设计与突变型序列完全匹配、3’端氨基封闭的非标记探针，通过高分辨率熔解曲线分析(HRM)结合非标记探针，检测嵌入双链DNA的饱和染料EvaGreen荧光值的变化，得到探针与不同基因型目的片段解链的Tm值，并通过野生型和突变型不同的Tm值对其进行区分。分别成功地区分了两个位点的野生型和突变型个体，实现了对两个突变位点的单重检测。本体系适用于检测线粒体DNA中C1494T和A1555G突变，具有结果准确、可靠，重复性好，价格低廉的特点。

公开(公告)号：CN110438210B

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN201910745351.8

申请日：2019-08-13

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈红岩 ,  陈弘远

IPC: C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及非小细胞肺癌靶向药物相关低频突变的多重富集检测方法，本发明以人类EGFR基因外显子19上的缺失突变中频率最高的2235_2249del‑15，2236_2250del‑15、外显子20上的T790M突变和外显子21上的L858R突变这四个突变作为靶标，针对每个突变位点分别设计引物、阻抑子和标记不同荧光的TaqMan探针，通过采集扩增过程中的荧光信号绘制扩增曲线，将扩增曲线的Cq值与标准曲线确定的阈值进行比较，判断样品是否存在对应突变。本发明体系针对cfDNA进行优化，使得体系能够在模板片段化程度高、野生型背景强的情况下，对目标序列实现扩增和检测。该方法兼具灵敏和多重的特点，使检测操作更为方便、快捷和准确，具有较大的应用价值。

公开(公告)号：CN106957902B

公开(公告)日：2020-12-04

申请号：CN201610940206.1

申请日：2016-11-01

Applicant: 复旦大学

Inventor： 卢大儒 ,  陈红岩 ,  陈弘远 ,  丁嘉琦 ,  王超

IPC: C12Q1/6883 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一组用于检测药物性耳聋相关位点的非标记探针。分别针对两个位点设计与突变型序列完全匹配、3’端氨基封闭的非标记探针，通过高分辨率熔解曲线分析(HRM)结合非标记探针，检测嵌入双链DNA的饱和染料EvaGreen荧光值的变化，得到探针与不同基因型目的片段解链的Tm值，并通过野生型和突变型不同的Tm值对其进行区分。分别成功地区分了两个位点的野生型和突变型个体，实现了对两个突变位点的单重检测。本体系适用于检测线粒体DNA中C1494T和A1555G突变，具有结果准确、可靠，重复性好，价格低廉的特点。