公开(公告)号：CN101798346B

公开(公告)日：2013-05-29

申请号：CN200910046024.X

申请日：2009-02-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 马端 ,  木金贵 ,  王际平 ,  王慧君 ,  梁旺

IPC: C07K14/81 ,  A61K38/57 ,  A61P7/02

Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)的高效表达。经对LTFPI序列中的糖基化位点和C末端中4个与受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)结合中发挥重要作用的位点进行突变，根据酵母利用密码子的偏爱性对突变后的蛋白编码基因进行系列优化，采用重叠PCR方法，获得优化后的LTFPI基因。与真核表达载体重组，转化毕赤酵母，筛选高表达毕赤酵母工程菌株。经发酵、诱导表达、收集上清、浓缩、离子交换和肝素亲和层析纯化获得高纯度的LTFPI，活性测定显示该LTFPI具有良好的抗凝功能。可进一步制备抗凝血药物。

公开(公告)号：CN101423552A

公开(公告)日：2009-05-06

申请号：CN200810034154.7

申请日：2008-02-29

Applicant: 复旦大学

Inventor： 马端 ,  程训佳 ,  刘静 ,  王羽雄 ,  木金贵 ,  梁旺 ,  王际平

IPC: C07K16/36 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12N1/19 ,  C12R1/19 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及应用天然的人源抗体基因库筛选具有抗凝血功能的抗人组织因子Fab片段。本发明通过构建人源抗体基因库并经过ELISA、稀释凝血酶原时间、测序分析等从库中筛选到具有抗凝活性的人源抗人组织因子Fab，命名为hTFFab148，经大量的表达纯化及进一步的鉴定，证实本发明的人源抗组织因子Fab抗体具有抗凝活性且不会产生与传统的抗凝剂组合药物相关的不需要的副作用，并具有超出现有技术的TF抗体的特性。

公开(公告)号：CN101423552B

公开(公告)日：2012-05-16

申请号：CN200810034154.7

申请日：2008-02-29

Applicant: 复旦大学

Inventor： 马端 ,  程训佳 ,  刘静 ,  王羽雄 ,  木金贵 ,  梁旺 ,  王际平

IPC: C07K16/36 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12N1/19 ,  C12R1/645 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及应用天然的人源抗体基因库筛选具有抗凝血功能的抗人组织因子Fab片段。本发明通过构建人源抗体基因库并经过ELISA、稀释凝血酶原时间、测序分析等从库中筛选到具有抗凝活性的人源抗人组织因子Fab，命名为hTFFab148，经大量的表达纯化及进一步的鉴定，证实本发明的人源抗组织因子Fab抗体具有抗凝活性且不会产生与传统的抗凝剂组合药物相关的不需要的副作用，并具有超出现有技术的TF抗体的特性。

公开(公告)号：CN101798346A

公开(公告)日：2010-08-11

申请号：CN200910046024.X

申请日：2009-02-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 马端 ,  木金贵 ,  王际平 ,  王慧君 ,  梁旺

IPC: C07K14/81 ,  A61K38/57 ,  A61P7/02

Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)的高效表达。经对LTFPI序列中的糖基化位点和C末端中4个与受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)结合中发挥重要作用的位点进行突变，根据酵母利用密码子的偏爱性对突变后的蛋白编码基因进行系列优化，采用重叠PCR方法，获得优化后的LTFPI基因。与真核表达载体重组，转化毕赤酵母，筛选高表达毕赤酵母工程菌株。经发酵、诱导表达、收集上清、浓缩、离子交换和肝素亲和层析纯化获得高纯度的LTFPI，活性测定显示该LTFPI具有良好的抗凝功能。可进一步制备抗凝血药物。