公开(公告)号：CN111635862B

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202010646409.6

申请日：2020-07-07

Applicant: 复旦大学

Inventor： 全哲学 ,  蒋秋悦 ,  夏飞 ,  戴红

IPC: C12N1/02 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种全程硝化菌的富集培养方法，其包含以下步骤：S1，采用无菌滤膜过滤水体样品；S2，将无菌滤膜放置于添加有底物的富集培养基中培养，获得经富集培养的滤膜；底物包含氨或尿素；S3，采用新的无菌滤膜，作为转接滤膜，与经富集培养的滤膜共同放置于新的添加有底物的富集培养基中培养；转接滤膜与经富集培养的滤膜接触，使得全程硝化菌从经富集培养的滤膜转接到转接滤膜上；S4，取出转接滤膜，放置于新的添加有底物的富集培养基中培养；S5，将转接滤膜上的全程硝化菌继续采用滤膜转接若干次，以达到全程硝化菌富集培养的目的；培养过程中定期取出部分滤膜抽提DNA，进行定量PCR分析，以确认全程硝化菌的富集情况。

公开(公告)号：CN105238867B

公开(公告)日：2019-10-15

申请号：CN201510743453.8

申请日：2015-11-05

Applicant: 复旦大学

Inventor： 全哲学 ,  王建功 ,  杰马纳 ,  夏飞

IPC: C12Q1/686 ,  C12Q1/04

Abstract: 本发明属于生物分析技术领域，具体为一种同时分析氨氧化或甲烷氧化相关细菌群落结构的分析方法。本发明步骤为：设计能同时覆盖颗粒性甲烷氧化酶α亚基基因和氨氧化单加氧酶α亚基基因的高简并加tag引物；利用此引物对环境样品中提取的基因组DNA进PCR扩增；利用barcode标记的tag引物对纯化过的第一步PCR产物进行PCR扩增；对扩增序列进行测序，分析得到氨氧化或甲烷氧化相关细菌的群落结构特征。本方法的保真性经不同pmoA/amoA基因重组质粒混合实验的验证，故本方法能够在显著提高引物覆盖度的前提下提高PCR扩增效果，并真实反映环境样品中不同类群的分布，使得环境样品中氨氧化或甲烷氧化细菌群落结构分析更加完整。本方法也可应用于其它功能微生物群落结构分析。

公开(公告)号：CN111635862A

公开(公告)日：2020-09-08

申请号：CN202010646409.6

申请日：2020-07-07

Applicant: 复旦大学

Inventor： 全哲学 ,  蒋秋悦 ,  夏飞 ,  戴红

IPC: C12N1/02 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种全程硝化菌的富集培养方法，其包含以下步骤：S1，采用无菌滤膜过滤水体样品；S2，将无菌滤膜放置于添加有底物的富集培养基中培养，获得经富集培养的滤膜；底物包含氨或尿素；S3，采用新的无菌滤膜，作为转接滤膜，与经富集培养的滤膜共同放置于新的添加有底物的富集培养基中培养；转接滤膜与经富集培养的滤膜接触，使得全程硝化菌从经富集培养的滤膜转接到转接滤膜上；S4，取出转接滤膜，放置于新的添加有底物的富集培养基中培养；S5，将转接滤膜上的全程硝化菌继续采用滤膜转接若干次，以达到全程硝化菌富集培养的目的；培养过程中定期取出部分滤膜抽提DNA，进行定量PCR分析，以确认全程硝化菌的富集情况。

公开(公告)号：CN105238867A

公开(公告)日：2016-01-13

申请号：CN201510743453.8

申请日：2015-11-05

Applicant: 复旦大学

Inventor： 全哲学 ,  王建功 ,  杰马纳 ,  夏飞

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 本发明属于生物分析技术领域，具体为一种同时分析氨氧化或甲烷氧化相关细菌群落结构的分析方法。本发明步骤为：设计能同时覆盖颗粒性甲烷氧化酶α亚基基因和氨氧化单加氧酶α亚基基因的高简并加tag引物；利用此引物对环境样品中提取的基因组DNA进PCR扩增；利用barcode标记的tag引物对纯化过的第一步PCR产物进行PCR扩增；对扩增序列进行测序，分析得到氨氧化或甲烷氧化相关细菌的群落结构特征。本方法的保真性经不同pmoA/amoA基因重组质粒混合实验的验证，故本方法能够在显著提高引物覆盖度的前提下提高PCR扩增效果，并真实反映环境样品中不同类群的分布，使得环境样品中氨氧化或甲烷氧化细菌群落结构分析更加完整。本方法也可应用于其它功能微生物群落结构分析。