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公开(公告)号：CN111909949B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202010912922.5
申请日：2020-09-03
Applicant: 吉林大学第一医院
Abstract: 本发明公开了一种球形孢子丝菌HSP70_5重组蛋白的制备方法及其应用，通过提取球形孢子丝菌总RNA，利用反转录PCR获得cDNA，利用特异性引物扩增得到球形孢子丝菌热休克蛋白70(HSP70)异构体5基因全长序列，运用分子生物学方法进行基因片段的体外重组并制备基因片段对应的重组蛋白，将该重组蛋白应用于家兔可制备出相应的抗体，该抗体可用于制备对球形孢子丝菌感染早期快速诊断产品。本发明构建了球形孢子丝菌HSP70_5重组蛋白原核表达体系，通过诱导可以快速大量表达；利用Ni亲和层析柱一步完成纯化，纯化过程简单快捷；免疫动物制备高效价多克隆抗体，所制备的抗体与目的蛋白具有良好的反应特异性。
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公开(公告)号：CN111909949A
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN202010912922.5
申请日：2020-09-03
Applicant: 吉林大学第一医院
Abstract: 本发明公开了一种球形孢子丝菌HSP70_5重组蛋白的制备方法及其应用，通过提取球形孢子丝菌总RNA，利用反转录PCR获得cDNA，利用特异性引物扩增得到球形孢子丝菌热休克蛋白70(HSP70)异构体5基因全长序列，运用分子生物学方法进行基因片段的体外重组并制备基因片段对应的重组蛋白，将该重组蛋白应用于家兔可制备出相应的抗体，该抗体可用于制备对球形孢子丝菌感染早期快速诊断产品。本发明构建了球形孢子丝菌HSP70_5重组蛋白原核表达体系，通过诱导可以快速大量表达；利用Ni亲和层析柱一步完成纯化，纯化过程简单快捷；免疫动物制备高效价多克隆抗体，所制备的抗体与目的蛋白具有良好的反应特异性。
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公开(公告)号：CN118184799A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410449684.7
申请日：2024-04-15
Applicant: 吉林大学第一医院
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , G01N33/569 , G01N33/68 , G01N33/543 , G01N33/558 , G01N33/58
Abstract: 本案涉及一种球形孢子丝菌重组APRPG融合蛋白，是利用Hsp70‑1_8抗原表位结构域和富含糖基化修饰位点RPG蛋白以Linker序列连接的融合蛋白；Linker序列选自序列A或序列B；序列A如SEQ ID No:6所示；序列B在SEQ ID No:6所示的蛋白的N端和/或C端链接标签得到的融合蛋白。本发明试纸所用的金标蛋白为杆状病毒‑昆虫细胞表达的球形孢子丝菌重组APRPG融合蛋白，该蛋白兼具Hsp70‑1_8和RPG蛋白的免疫原性，与天然抗原结构近似，抗体的亲和力高，保证了天然的空间结构和修饰；本发明的试纸条特异性好，与白色念珠菌、烟曲霉、新型隐球菌阳性血清均没有交叉反应，灵敏感高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118294242A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410449966.7
申请日：2024-04-15
Applicant: 吉林大学第一医院
IPC: G01N1/30 , G01N21/64 , C12N15/866 , C07K19/00 , G01N33/569 , G01N33/533
Abstract: 本案涉及特异性球形孢子丝菌荧光染色液、制备方法及检测方法，荧光染色液中含有：经荧光素标记的重组AP融合蛋白荧光抗体、荧光增白剂、渗透剂、背景增强剂和防淬灭剂；重组AP融合蛋白荧光抗体是利用Hsp70‑1_8抗原表位结构域的AP区序列重复2次的融合蛋白作为抗原，免疫家兔后的多克隆抗体经荧光标记所得。本发明所用球形孢子丝菌重组AP融合蛋白与天然抗原结构近似，可以特异性与球形孢子丝菌结合，与白色念珠菌等菌株均没有交叉反应，灵敏感高；且不受标本限制，能够快速地区分球形孢子丝菌和其他真菌，大大提高球形孢子丝菌的检出效率；本发明其它所有的成分均匀分散于水中，可稳定共存于同一体系中，使用过程更加方便快捷。
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公开(公告)号：CN111978382A
公开(公告)日：2020-11-24
申请号：CN202010912909.X
申请日：2020-09-03
Applicant: 吉林大学第一医院
Abstract: 本发明涉及一种球形孢子丝菌Gp70(Glycoprotein 70)重组蛋白的制备方法及其应用，通过提取球形孢子丝菌总RNA，利用反转录PCR获得cDNA，利用特异性引物扩增得到球形孢子丝菌糖蛋白70(Gp70)基因全长序列，运用分子生物学方法进行基因片段的体外重组并制备基因片段对应的重组蛋白，将该重组蛋白应用于家兔可制备出相应的抗体，该抗体可用于制备对球形孢子丝菌感染早期快速诊断产品。本案构建了球形孢子丝菌Gp70重组蛋白原核表达体系，通过诱导可以快速大量表达；利用Ni亲和层析柱一步完成纯化，纯化过程简单快捷；免疫动物制备高效价多克隆抗体，所制备的抗体与目的蛋白具有良好的反应特异性。
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公开(公告)号：CN111978382B
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN202010912909.X
申请日：2020-09-03
Applicant: 吉林大学第一医院
Abstract: 本发明涉及一种球形孢子丝菌Gp70(Glycoprotein 70)重组蛋白的制备方法及其应用，通过提取球形孢子丝菌总RNA，利用反转录PCR获得cDNA，利用特异性引物扩增得到球形孢子丝菌糖蛋白70(Gp70)基因全长序列，运用分子生物学方法进行基因片段的体外重组并制备基因片段对应的重组蛋白，将该重组蛋白应用于家兔可制备出相应的抗体，该抗体可用于制备对球形孢子丝菌感染早期快速诊断产品。本案构建了球形孢子丝菌Gp70重组蛋白原核表达体系，通过诱导可以快速大量表达；利用Ni亲和层析柱一步完成纯化，纯化过程简单快捷；免疫动物制备高效价多克隆抗体，所制备的抗体与目的蛋白具有良好的反应特异性。
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公开(公告)号：CN111961682A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010912928.2
申请日：2020-09-03
Applicant: 吉林大学第一医院
Abstract: 本发明公开了一种球形孢子丝菌HSP70_1-8重组蛋白的制备方法及其应用，通过提取球形孢子丝菌总RNA，利用反转录PCR获得cDNA，利用特异性引物扩增得到球形孢子丝菌热休克蛋白70(HSP70)异构体1-8基因全长序列，运用分子生物学方法进行基因片段的体外重组并制备基因片段对应的重组蛋白，将该重组蛋白应用于家兔可制备出相应的抗体，该抗体可用于制备对球形孢子丝菌感染早期快速诊断产品。本发明构建了球形孢子丝菌HSP70_1-8重组蛋白原核表达体系，通过诱导可以快速大量表达；利用Ni亲和层析柱一步完成纯化，纯化过程简单快捷；免疫动物制备高效价多克隆抗体，所制备的抗体与目的蛋白具有良好的反应特异性。
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公开(公告)号：CN111171119A
公开(公告)日：2020-05-19
申请号：CN201910879134.8
申请日：2019-09-18
Applicant: 吉林大学第一医院
Abstract: 本发明公开了球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，包括：将培养有球形孢子丝菌的培养基离心，收集菌株沉淀；将菌株沉淀与裂解缓冲液混合，超声，离心，收集第一上清液；将第一上清液与十六烷基三甲基溴化铵混合，静置，离心，收集第二上清液；将第二上清液与硼酸混合，静置，离心，收集第三上清液；将第三上清液过刀豆球蛋白亲和层析柱，洗脱，收集洗脱液。本发明的提取方法不影响抗原的活性，得到的抗原纯度高。
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