一种检测非洲猪瘟病毒的crRNA以及试剂盒

    公开(公告)号:CN111647605A

    公开(公告)日:2020-09-11

    申请号:CN202010662810.9

    申请日:2020-07-10

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明提供了一种检测非洲猪瘟病毒的crRNA以及试剂盒,属于病毒检测技术领域。本发明中所述crRNA为引导CRISPR-Cas12a特异性结合非洲猪瘟靶标DNA的crRNA;本发明所述的试剂盒包括所述的靶标DNA、crRNA、CRISPR-Cas12a、优化后的检测缓冲液,ssDNA探针和RNA酶抑制剂;CRISPR-Cas12a在crRNA的引导下识别靶标分子非洲猪瘟DNA后,CRISPR-Cas12a、crRNA和靶标DNA分子结合成复合物切割检测体系内的ssDNA荧光探针,产生大量荧光可被检测。本发明所述试剂盒检测特异性好,灵敏度高,操作简单,耗时短。

    体外转录调控DNA
    5.
    发明授权

    公开(公告)号:CN101984062B

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN201010182404.9

    申请日:2010-05-26

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明涉及一种维持干细胞自我更新的6个猪源关键基因的体外转录质粒构建,其特征在于具体制备方法如下:首先设计基因体外转录空载体Vitro-TransPMD-18T,然后获得EGFP和维持干细胞自我更新的猪源的6个关键基因的cDNA,并按相应的酶切位点进行酶切连接,最后用体外转录试剂盒对7个体外转录质粒进行体外转录,得到相应的mRNA,然后将Vitro-Trans-EGFP转染进猪胚胎成纤维细胞:其6个基因体外转录出的mRNA转染进猪胚胎成纤维细胞后能够使其转变成猪的多能干细胞;6个基因体外转录出的mRNA能够高效翻译。

    特异性结合布鲁氏菌外膜蛋白Omp31核酸适配体及其用途

    公开(公告)号:CN114438090B

    公开(公告)日:2023-08-04

    申请号:CN202111309825.8

    申请日:2021-11-07

    Abstract: 本发明提供一条与布鲁氏菌外膜蛋白Omp31具有高亲和力的核酸适配体,该适配体的核苷酸序列如序列表中序列1所示,全长76bp,两端20bp为固定序列,中间36bp由筛选后确定出唯一确定序列。本发明利用SELEX技术,以原核表达的Omp31为靶标蛋白,以羧基磁珠为固相载体,通过9轮筛选及高通量测序,从1015初始DNA文库中,筛选得出本条与靶标具有高亲和力的核酸适配体。核酸适配体相对于抗体,具有易合成保存、成本低廉等优点,为开发新型夹心ELISA检测试剂盒提供了新的思路,对布鲁氏菌的检测和预防具有重要意义。

    特异性结合布鲁氏菌外膜蛋白Omp31核酸适配体及其用途

    公开(公告)号:CN114438090A

    公开(公告)日:2022-05-06

    申请号:CN202111309825.8

    申请日:2021-11-07

    Abstract: 本发明提供一条与布鲁氏菌外膜蛋白Omp31具有高亲和力的核酸适配体,该适配体的核苷酸序列如序列表中序列1所示,全长76bp,两端20bp为固定序列,中间36bp由筛选后确定出唯一确定序列。本发明利用SELEX技术,以原核表达的Omp31为靶标蛋白,以羧基磁珠为固相载体,通过9轮筛选及高通量测序,从1015初始DNA文库中,筛选得出本条与靶标具有高亲和力的核酸适配体。核酸适配体相对于抗体,具有易合成保存、成本低廉等优点,为开发新型夹心ELISA检测试剂盒提供了新的思路,对布鲁氏菌的检测和预防具有重要意义。

    能有效编辑猪PCBP1基因的sgRNA及其应用

    公开(公告)号:CN113684209A

    公开(公告)日:2021-11-23

    申请号:CN202110756558.2

    申请日:2021-07-05

    Abstract: 本发明提供一条能有效敲除猪PCBP1基因的sgRNA,其特征在于:所述sgRNA特异性靶向猪PCBP1基因的第485位到504位的序列,其编码基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。本发明利用CRISPR/Cas9技术,成功地在PK15细胞系中敲除了PCBP1基因,结果显示该敲除细胞系能够在一定程度上抑制CSFV在细胞中的增殖,为制备PCBP1敲除的具有先天的抗CSFV能力的基因编辑猪提供了可能,对于抗猪瘟病毒药物靶点筛选研究及抗病毒猪的遗传育种具有重要意义。

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