公开(公告)号：CN114921395B

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202210574619.8

申请日：2022-05-25

Applicant: 厦门大学

Inventor： 凌雪萍 ,  陈少锋 ,  卢英华 ,  姚传义 ,  陈翠雪 ,  赵旭蕊

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/56 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了用CRISPR‑Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用。本发明涵盖敲除三个海藻糖酶基因treA、treC及treF构建耐盐菌株和磷脂酶D表达菌株及优化磷脂酶D表达条件两部分。所述磷脂酶D表达菌株构建采用质粒pBADKP‑pld2，优化表达条件包含诱导条件优化、培养基优化、氯化钠及氯化镁胁迫。在优选的表达条件下，一方面获得高水平磷脂酶D产量，另一方面极大地减少了磷脂酶D的细胞泄露问题，维持细胞的表达活性。本发明能实现短时间内磷脂酶D高表达，具有优良的时空产率。

公开(公告)号：CN117106748A

公开(公告)日：2023-11-24

申请号：CN202311074904.4

申请日：2023-08-24

Applicant: 厦门大学

Inventor： 卢英华 ,  林水治 ,  凌雪萍 ,  姚传义 ,  赵旭蕊 ,  陈翠雪

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/6481 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种磷脂酶D突变体及其应用，该突变体相较于如SEQ ID NO：1所示野生型磷脂酶D的氨基酸序列，所述突变体具有第381位点的突变。该突变体使得酶催化生产磷脂酰甘油的产率得到提高，该突变体的水解酶活明显下降，有利于减少合成生产稀有磷脂PG时的水解副反应，该突变体转磷脂酰基酶活明显提高，具有更高的工业应用价值。

公开(公告)号：CN114921395A

公开(公告)日：2022-08-19

申请号：CN202210574619.8

申请日：2022-05-25

Applicant: 厦门大学

Inventor： 凌雪萍 ,  陈少锋 ,  卢英华 ,  姚传义 ,  陈翠雪 ,  赵旭蕊

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/56 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了用CRISPR‑Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用。本发明涵盖敲除三个海藻糖酶基因treA、treC及treF构建耐盐菌株和磷脂酶D表达菌株及优化磷脂酶D表达条件两部分。所述磷脂酶D表达菌株构建采用质粒pBADKP‑pld2，优化表达条件包含诱导条件优化、培养基优化、氯化钠及氯化镁胁迫。在优选的表达条件下，一方面获得高水平磷脂酶D产量，另一方面极大地减少了磷脂酶D的细胞泄露问题，维持细胞的表达活性。本发明能实现短时间内磷脂酶D高表达，具有优良的时空产率。