公开(公告)号：CN103966255A

公开(公告)日：2014-08-06

申请号：CN201410227461.2

申请日：2014-05-27

Applicant: 南开大学

Inventor： 白艳玲 ,  刘盛海 ,  路瑶 ,  王宏刚 ,  徐海津 ,  王勇 ,  张秀明 ,  乔明强

IPC: C12N15/82 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及黄瓜离体叶绿体电转化方法。以黄瓜(Cucumis sativum)无菌子叶分离的叶绿体为材料，建立了在适宜体积和叶绿体浓度与表达载体比例下的黄瓜离体叶绿体电转化体系。转化后叶绿体经短时孵育、离心、DNase I消化后进行裂解，以提取的转化叶绿体DNA和RNA为模板进行PCR和RT-PCT鉴定，结果证明，叶绿体表达载体不仅能高效转入离体叶绿体中，而且在转录水平能检测到外源基因的表达。本发明克服了高等植物细胞内叶绿体转化周期长、技术难和成本高等难题，为高等植物叶绿体转化载体构建和关键元件的功能鉴定以及叶绿体基因表达调控和细胞工程等基础理论与应用研究提供了有效的新途径。