公开(公告)号：CN113151125A

公开(公告)日：2021-07-23

申请号：CN202110112107.5

申请日：2021-01-27

Applicant: 南开大学

Inventor： 白芳 ,  岳卓 ,  吴卫辉 ,  靳永新 ,  程志晖

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/78 ,  A61K47/46 ,  A61K39/39 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00 ,  C12R1/385

Abstract: 本发明公开了一种减毒铜绿假单胞菌的构建方法和应用，过程包括：将铜绿假单胞菌PAK‑JΔSTY菌株基因组中ndk基因敲除和三型蛋白分泌系统T3SS抑制性基因popN敲除，获得减毒铜绿假单胞菌aPA‑Δ5，在aPA‑Δ5的基础上，敲除murI基因，获得生物安全性更高的减毒铜绿假单胞菌aPA‑Δ6。该方法构建得到的铜绿假单胞菌毒性较弱，将其用于制备疫苗中，可有效激活免疫细胞的应答。

公开(公告)号：CN115820707B

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202210978289.9

申请日：2022-08-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 白芳 ,  岳卓 ,  吴卫辉 ,  程志晖 ,  靳永新

IPC: C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12N15/64 ,  C12N15/60 ,  C07K14/165 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/385

Abstract: 本发明提供了一种无抗生素介入的细菌表达系统的构建方法及应用，涉及原核表达技术领域。本发明提供了以减毒铜绿假单胞菌PAK‑JΔ6菌株为基础菌，删除嘌呤合成关键基因purEK，获得腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK‑JΔ6(Ade)。本发明通过引入携带purEK操纵子的质粒pExoS54(Ade)回补PAK‑JΔ6(Ade)背景菌株的营养缺陷，使其可在无嘌呤的培养基中生长。本发明利用purEK操纵子替换掉质粒上原有的氨苄青霉素抗性(AmpR)基因盒，利用腺嘌呤营养限制作为pExoS54(Ade)质粒的维持压力，从而避免了抗生素的使用。

公开(公告)号：CN115820707A

公开(公告)日：2023-03-21

申请号：CN202210978289.9

申请日：2022-08-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 白芳 ,  岳卓 ,  吴卫辉 ,  程志晖 ,  靳永新

IPC: C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12N15/64 ,  C12N15/60 ,  C07K14/165 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/385

Abstract: 本发明提供了一种无抗生素介入的细菌表达系统的构建方法及应用，涉及原核表达技术领域。本发明提供了以减毒铜绿假单胞菌PAK‑JΔ6菌株为基础菌，删除嘌呤合成关键基因purEK，获得腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK‑JΔ6(Ade)。本发明通过引入携带purEK操纵子的质粒pExoS54(Ade)回补PAK‑JΔ6(Ade)背景菌株的营养缺陷，使其可在无嘌呤的培养基中生长。本发明利用purEK操纵子替换掉质粒上原有的氨苄青霉素抗性(AmpR)基因盒，利用腺嘌呤营养限制作为pExoS54(Ade)质粒的维持压力，从而避免了抗生素的使用。