公开(公告)号：CN109868255A

公开(公告)日：2019-06-11

申请号：CN201910207024.7

申请日：2019-03-18

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 叶建仁 ,  陈飞飞 ,  付欢欢 ,  吴学连 ,  朱明龙 ,  方雪琦 ,  薛飞扬

IPC: C12N3/00 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种促进拟茎点霉产生大量分生孢子的方法，包括：1)采用PDA培养基在固体平板上活化拟茎点霉菌种，获得到菌丝体；2)采用打孔法取步骤1)的菌丝体接种于装有PDA培养基的培养皿中，置于黑暗培养箱培养；3)待拟茎点霉菌丝长满整个培养基，成白色，絮状后，转移至黑光灯下或黑暗培养条件下，继续培养，产生大量分生孢子，总分生孢子产量不小于1.0×1011个/皿。本发明的促进拟茎点霉产生大量分生孢子的方法，以塑料培养皿结合黑光处理条件，使得培养皿可见明显的孢子堆，平均孢子堆数量达到109个/皿，每个孢子堆所含孢子数平均达到5.613×109个，且产生了大量乙型孢子，可生长速率远远大于以往拟茎点霉的产孢子方法，具有很好的实用性。

公开(公告)号：CN108130339A

公开(公告)日：2018-06-08

申请号：CN201810026881.2

申请日：2018-01-11

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 叶建仁 ,  陈飞飞 ,  刘婉慧 ,  吴学连 ,  黄金思

IPC: C12N15/74 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种适用于吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的高效转化方法，包括：1)取感受态细胞，冰浴融化；2)取pHKT2质粒加入含感受态细胞混匀，冰浴15～75min；3)液氮冷冻30～150sec，32～42℃水浴1～5min；4)冰浴5min；5)加LB无抗生素液体培养基，200rpm，30℃震荡培养3h；6)离心浓缩菌液，弃上清液，重悬菌液后涂布于含有TMP的平板，28℃恒温培养，36h后获得转化细胞。本发明的方法，操作简单，转化率高，最高达到6363.64cfu/μg。本申请成功建立生防菌B.pyrrocinia JK-SH007的最优转化体系，为后续的实验提供技术支持。