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公开(公告)号：CN106591338B
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201611150967.3
申请日：2016-12-14
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种增加植物来源糖基转移酶基因可溶性异源表达的方法，将标签蛋白基因与目标蛋白基因构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中构建得到重组菌，重组菌诱导表达，标签蛋白与目标蛋白进行融合表达，从而提高糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达；所述标签蛋白基因为3’‑磷酸腺苷‑5’磷酸酶基因、2‑氧代‑3‑脱氧‑6磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因或者抗终止作用因子基因中的至少一种，将标签蛋白基因构建在表达载体的Nde I和Hind III之间，将目标蛋白构建在Hind III和EcoR I之间，且标签蛋白和目标蛋白的之间添加一组肠激酶酶切位点，蛋白序列为DDDDK。融合表达与之前目标蛋白单独表达相比，蛋白的可溶性增加一倍，且酶活提高了80%。
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公开(公告)号：CN104726523B
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201510139428.9
申请日：2015-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法，该方法利用番茄UDP‑糖基转移酶和土豆蔗糖合成酶，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料生产莱鲍迪苷M。本发明的方法首先利用基因工程技术获得UDP‑葡萄糖基转移酶和蔗糖合酶的高产重组菌株，然后收集生物酶粗品直接进行催化反应，反应体系中不添加UDP或UDP‑葡萄糖，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料，通过蔗糖合酶催化UDP‑葡萄糖高效循环，通过番茄UDP‑葡萄糖基转移酶的作用，催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷M。与已有的莱鲍迪苷M制备方法相比，工艺步骤短，成本低，具有重要的应用价值和良好的经济性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109750072A
公开(公告)日：2019-05-14
申请号：CN201910095404.6
申请日：2019-01-31
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，该方法利用番茄来源UDP-糖基转移酶和马铃薯来源蔗糖合成酶，以甜菊甙为原料一步糖基化反应生产莱鲍迪苷E，同时采用定点突变技术，改造UDP-糖基转移酶，进一步提高莱鲍迪苷E的产率。本发明的方法无需添加UDP-葡萄糖和UDP，利用粗提液中UDP及额外添加的蔗糖在蔗糖合成酶分解作用下获得UDP-葡萄糖作为糖基化反应的原材料，建立双酶循环反应体系，有效催化甜菊甙生产莱鲍迪苷E。其中，莱鲍迪苷E产率可达65%以上；后期通过定点突变技术，经筛选获得N358F有益突变体，其催化莱鲍迪苷E产率提高，最高可达85%以上。与已有的莱鲍迪苷E制备方法相比，工艺步骤简单，成本低廉，且产率高，具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN109750072B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN201910095404.6
申请日：2019-01-31
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，该方法利用番茄来源UDP‑糖基转移酶和马铃薯来源蔗糖合成酶，以甜菊甙为原料一步糖基化反应生产莱鲍迪苷E，同时采用定点突变技术，改造UDP‑糖基转移酶，进一步提高莱鲍迪苷E的产率。本发明的方法无需添加UDP‑葡萄糖和UDP，利用粗提液中UDP及额外添加的蔗糖在蔗糖合成酶分解作用下获得UDP‑葡萄糖作为糖基化反应的原材料，建立双酶循环反应体系，有效催化甜菊甙生产莱鲍迪苷E。其中，莱鲍迪苷E产率可达65%以上；后期通过定点突变技术，经筛选获得N358F有益突变体，其催化莱鲍迪苷E产率提高，最高可达85%以上。与已有的莱鲍迪苷E制备方法相比，工艺步骤简单，成本低廉，且产率高，具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN109750071A
公开(公告)日：2019-05-14
申请号：CN201910095402.7
申请日：2019-01-31
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物催化合成莱鲍迪苷M的方法，首先，利用番茄来源UDP-糖基转移酶和马铃薯来源蔗糖合成酶，以甜菊甙为原料糖基化反应合成莱鲍迪苷E；随后，利用甜叶菊来源UDP-糖基转移酶和马铃薯来源蔗糖合成酶，以莱鲍迪苷E为原料进一步糖基化反应合成莱鲍迪苷M。本发明的方法利用分子克隆技术，获得异源表达UDP-糖基转移酶和蔗糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌，经发酵产酶后以细胞粗提液直接进行催化反应，利用粗提液中UDP及额外添加的蔗糖在蔗糖合成酶分解作用下获得UDP-葡萄糖作为糖基化反应的原材料，建立双酶循环反应体系，有效催化甜菊甙生产莱鲍迪苷M。原料成本更为低廉，工艺步骤简单，具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN106591338A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201611150967.3
申请日：2016-12-14
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/1048 , C07K2319/00
Abstract: 本发明公开了一种增加植物来源糖基转移酶基因可溶性异源表达的方法，将标签蛋白基因与目标蛋白基因构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中构建得到重组菌，重组菌诱导表达，标签蛋白与目标蛋白进行融合表达，从而提高糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达；所述标签蛋白基因为3’‑磷酸腺苷‑5’磷酸酶基因、2‑氧代‑3‑脱氧‑6磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因或者抗终止作用因子基因中的至少一种，将标签蛋白基因构建在表达载体的Nde I和Hind III之间，将目标蛋白构建在Hind III和EcoR I之间，且标签蛋白和目标蛋白的之间添加一组肠激酶酶切位点，蛋白序列为DDDDK。融合表达与之前目标蛋白单独表达相比，蛋白的可溶性增加一倍，且酶活提高了80%。
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公开(公告)号：CN104726523A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201510139428.9
申请日：2015-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法，该方法利用番茄UDP-糖基转移酶和土豆蔗糖合成酶，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料生产莱鲍迪苷M。本发明的方法首先利用基因工程技术获得UDP-葡萄糖基转移酶和蔗糖合酶的高产重组菌株，然后收集生物酶粗品直接进行催化反应，反应体系中不添加UDP或UDP-葡萄糖，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料，通过蔗糖合酶催化UDP-葡萄糖高效循环，通过番茄UDP-葡萄糖基转移酶的作用，催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷M。与已有的莱鲍迪苷M制备方法相比，工艺步骤短，成本低，具有重要的应用价值和良好的经济性。
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