公开(公告)号：CN116426559A

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202310534971.3

申请日：2023-05-12

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 仲森林 ,  黄利平 ,  祁映璇 ,  管景灏 ,  姚瑶 ,  费正月 ,  刘冠楠

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/64 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种利用长引物快速从头合成目的片段的方法，包括如下步骤：(1)设计合成多条存在碱基重叠、覆盖整个目的片段的长引物；(2)使用偶数条步骤(1)获得的长引物交替重叠延伸进行PCR扩增，获得PCR产物；(3)利用一步法同源重组将步骤(2)获得的PCR产物直接整合到线性化载体中，得到重组产物；(4)将步骤(3)获得的重组产物转化入感受态细胞，获得带有目的基因的转化子；所述方法从目的基因中长引物的设计到最终产品耗时2～5h。本发明所提供的方法适用于长片段DNA快速合成，具有合成周期短，正确率高的特点，适用于具有高G+C含量、重复序列或复杂的二级结构的DNA合成。