公开(公告)号：CN113754754A

公开(公告)日：2021-12-07

申请号：CN202010492246.0

申请日：2020-06-02

Applicant: 南京大学

Inventor： 沈萍萍 ,  杨南飞 ,  郑薇 ,  樊继强 ,  王婧悦

IPC: C07K14/705 ,  C07K1/34 ,  C07K1/22 ,  C07K1/36 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明属于生物技术领域的蛋白质复性方法，针对核受体蛋白的结构特性，以锌离子辅助的梯度透析复性方法，实现对全长核受体蛋白的完全复性，恢复其生物学活性。本发明根据核受体蛋白复性过程中的不同状态，优化透析复性液的组分梯度，使得在不同的复性阶段，以较合适的盐离子强度，稳定剂及中间态抑制剂浓度帮助核受体蛋白进行折叠。此外，针对核受体蛋白DNA结合区(DNA binding domain，DBD)高疏水性的结构特点，引入10μM的硫酸锌，帮助复性过程中DBD区域形成正确的锌指结构，减小因热力学不稳定而导致的蛋白质折叠失败。相比以往的针对核受体蛋白的复性方法，该种方法可实现全长蛋白质(非蛋白截短体)的完全复性，操作方法简单，得率可达30％以上。复性获得的核受体蛋白具备天然活性，可用于后续生物学功能分析及结构生物学相关应用。

公开(公告)号：CN113754754B

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202010492246.0

申请日：2020-06-02

Applicant: 南京大学

Inventor： 沈萍萍 ,  杨南飞 ,  郑薇 ,  樊继强 ,  王婧悦

IPC: C07K14/705 ,  C07K1/34 ,  C07K1/22 ,  C07K1/36 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明属于生物技术领域的蛋白质复性方法，针对核受体蛋白的结构特性，以锌离子辅助的梯度透析复性方法，实现对全长核受体蛋白的完全复性，恢复其生物学活性。本发明根据核受体蛋白复性过程中的不同状态，优化透析复性液的组分梯度，使得在不同的复性阶段，以较合适的盐离子强度，稳定剂及中间态抑制剂浓度帮助核受体蛋白进行折叠。此外，针对核受体蛋白DNA结合区(DNA binding domain，DBD)高疏水性的结构特点，引入10μM的硫酸锌，帮助复性过程中DBD区域形成正确的锌指结构，减小因热力学不稳定而导致的蛋白质折叠失败。相比以往的针对核受体蛋白的复性方法，该种方法可实现全长蛋白质(非蛋白截短体)的完全复性，操作方法简单，得率可达30％以上。复性获得的核受体蛋白具备天然活性，可用于后续生物学功能分析及结构生物学相关应用。