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公开(公告)号：CN119876079A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202510046363.7
申请日：2025-01-13
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了多聚磷酸激酶突变体及其制备方法和应用，野生型多聚磷酸激酶来自铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa PAO1，使用定向进化的手段对其活性位点进行突变，得到了催化合成ATP活性高的多聚磷酸激酶突变体，其对底物ADP或AMP的相对活性远高于野生型，所述突变为D307M、W408A、Y431P中的至少一种，或E304V、P331S、Y431P中的至少一种。本发明实现了由廉价底物向高价值产物的高效合成，有助于ATP的工业生产，在医药等领域中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN119709670A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411935971.5
申请日：2024-12-26
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了4‑丙基愈创木酚氧化酶突变体及其制备方法和应用，野生型4‑丙基愈创木酚氧化酶来自简青霉Penicillium simplicissimum，使用定向进化的手段对其活性中心进行改造，得到了具有较高活性、顺反选择性和反式异丁香酚产率的4‑丙基愈创木酚氧化酶突变体D170E、S426T、S50Q/D170E、D170E/L411V和D170E/L411V/S106C，实现了由廉价4‑丙基愈创木酚向高价值的反式异丁香酚的高效合成，有利于反式异丁香酚的工业化合成与应用。
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公开(公告)号：CN119662507A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202411924439.3
申请日：2024-12-25
Applicant: 南京大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12N15/90 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N9/00 , C12N9/02 , C12N9/10 , C12P21/02 , C12R1/125 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了高产表面活性素的枯草芽孢杆菌、相关酶突变体及其制备方法，所述枯草芽孢杆菌由基因改造方法获得，能够高产表面活性素，最高可达9.4 g/L；本发明还提供所述枯草芽孢杆菌中参与表面活性素合成的关键酶突变体，包括生物素羧化酶IdeHA突变体、生物素羧化酶accBC突变体、烯酰还原酶fabI突变体、丙二酰转移酶fabD突变体和二氢硫辛酰脱氢酶IPdU突变体。本发明公开的高产表面活性素的枯草芽孢杆菌及其制备方法，有助于实现表面活性素的工业化生产与商业化应用。
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公开(公告)号：CN117904079B
公开(公告)日：2024-12-10
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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公开(公告)号：CN118773151A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202410754406.2
申请日：2024-06-12
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种异丁香酚双加氧酶的突变体及其制备方法和应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列中，第216位，第281位，第283位，第307位中至少有一个突变。通过对异丁香酚双加氧酶进行合理设计，最终获得的突变体，具有较高的产率，实现由廉价异丁香酚向高价值的香料香兰素的高效合成，为工业合成香兰素奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118726284A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410754410.9
申请日：2024-06-12
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种生物催化合成香兰素的双加氧酶的突变体及其制备方法与应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中，在332位，第401位，第553位中至少有一个突变；通过对4‑乙烯愈创木酚的芳香族双加氧酶序列进行突变，经过筛选，该系列突变体能够高高效催化4‑乙烯愈创木酚生成香兰素，其具有比模板高出5～7倍的产率。
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公开(公告)号：CN119391663A
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411298449.0
申请日：2024-09-18
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种高产诺卡酮的醇脱氢酶突变体及其制备方法，对来源于益智（Alpinia oxyphylla）的醇脱氢酶进行定点突变，所述突变为S197V、M144C、L196A中的至少一种。本发明提供的醇脱氢酶突变体具有高催化活性，突变体M144C/L196A/S197V催化诺卡醇制备诺卡酮的产率可达99%，是原始酶的4.32倍；所述醇脱氢酶突变体催化合成诺卡酮所需的生产工艺简单、反应条件温和、生产过程环保，有利于诺卡酮的工业化生产，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN118620855A
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410799647.9
申请日：2024-06-20
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种乙醛脱氢酶的突变体及其制备方法和应用，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列中，第119位，第123位，第268位，第292位，第425位至少有一个氨基酸进行置换。本发明利用蛋白质工程技术，通过定点突变，对乙醛脱氢酶进行改造，提高了其酶活性和催化效率。
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公开(公告)号：CN117904079A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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公开(公告)号：CN119709671A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411935983.8
申请日：2024-12-26
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了香草醇氧化酶突变体及其制备方法和应用，野生型香草醇氧化酶来自简青霉Penicillium simplicissimum，使用定向进化的手段对其活性中心进行改造，得到了具有较高活性、顺反选择性和顺式异丁香酚产率的香草醇氧化酶突变体，所述突变为S106L、L316F或I468L中的至少一种。本发明实现了由廉价4‑丙基愈创木酚向顺式异丁香酚的高效合成，有利于顺式异丁香酚的工业化合成与应用。
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