公开(公告)号：CN116875670A

公开(公告)日：2023-10-13

申请号：CN202310765256.0

申请日：2023-06-27

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 丁静 ,  付卫民 ,  赵晓冰 ,  项磊 ,  顾婷婷 ,  李义

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于突变育种技术领域，具体涉及一种基于高通量测序的突变体筛选方法。将待测突变群体划分为不超过250个杂合或500个纯合个体的检测池，利用野生型DNA对检测池DNA进行3倍以上稀释，获得对应稀释池DNA。对检测池和对应稀释池进行目标片段的相同引物PCR扩增及产物高通量测序，将测序所得序列拼接至野生型参考序列，计算每个位点在检测池和对应稀释池中的变异核苷酸频率(NVF)及两者间的比值。若一个位点处的NVF比值>1.5，且其检测池和稀释池中的NVF均大于对应理论NVF值的80％，则该位点存在突变，而该检测池中存在突变体。本发明准确灵敏、简便易行，且将杂合突变体筛选分辨率从现有约1/100至少提高至1/250，对于提高大突变群体的突变体筛选效率具有重要意义。