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公开(公告)号：CN109706156B
公开(公告)日：2022-10-14
申请号：CN201910162508.4
申请日：2019-03-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种提早草莓的开花时间的基因、载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓FveDDM1基因，构建得到森林草莓FveDDM1基因的植物抑制表达载体GN2300‑FveDDM1，进而转染转基因工程菌，转入二倍体森林草莓‘Ruegen’中，获得FveDDM1基因的RNAi表达干扰株系。在离体叶片组织培养条件下，FveDDM1基因抑制表达系的草莓的开花时间显著早于野生型，表明下调森林草莓FveDDM1基因可提早草莓植株的开花时间，遗传转化FveDDM1干扰载体的森林草莓转基因株系的开花时间显著提早。本发明对提早草莓的开花时间具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109735538A
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201811610375.4
申请日：2018-12-27
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/12 , A01H6/74
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种提高草莓叶片再生效率的载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓细胞分裂素受体基因FveHK2的RNA干扰片段，构建得到森林草莓细胞分裂素受体基因FveHK2的植物抑制表达载体GN2300-FveHK2，进而转染转基因工程菌，转入二倍体森林草莓‘Hawaii 4’中，获得FveHK2基因的RNAi表达干扰株系，在离体叶片组织培养条件下，FveHK2基因抑制表达系的出芽时间早于野生型，出芽率显著高于野生型，表明遗传转化FveHK2干扰载体的森林草莓转基因株系叶片的再生能力显著提高。本发明对草莓叶片再生及转化效率的提高具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109706156A
公开(公告)日：2019-05-03
申请号：CN201910162508.4
申请日：2019-03-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种提早草莓的开花时间的基因、载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓FveDDM1基因，构建得到森林草莓FveDDM1基因的植物抑制表达载体GN2300-FveDDM1，进而转染转基因工程菌，转入二倍体森林草莓‘Ruegen’中，获得FveDDM1基因的RNAi表达干扰株系。在离体叶片组织培养条件下，FveDDM1基因抑制表达系的草莓的开花时间显著早于野生型，表明下调森林草莓FveDDM1基因可提早草莓植株的开花时间，遗传转化FveDDM1干扰载体的森林草莓转基因株系的开花时间显著提早。本发明对提早草莓的开花时间具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108611364A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810414408.1
申请日：2018-05-03
Applicant: 南京农业大学
Inventor： 丁静 , 陈龙正 , 李威 , 洛伦佐·卡廷-格拉齐尼 , 李义
Abstract: 本发明提供一种基于CRISPR-Cas9技术的非转基因突变体的制备方法，具体的，包括构建方法和筛选方法。构建方法为将CRISPR-Cas9及sgRNA预组装，定位在农杆菌的T-DNA，通过农杆菌侵染目标植物及共培养，CRISPR-Cas9及sgRNA的序列不需要整合到目标植物基因组里，就可实现目标植物的目的基因定点改变，使得到的目的基因定点改变的突变体材料，不需要经过有性生殖和后代分离群体筛选等过程，也不含有任何外源基因序列。本发明提供的高通量测序与高分辨率熔解曲线技术对得到的再生苗进行筛选，能够在转基因当代高效、快速地从再生苗中鉴定得到目的基因发生突变的突变体植株，即使是对突变体比例为混合群体1/100的低比例突变体筛选，本发明的筛选方法仍可保证优异的准确性和灵敏度。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108300734A
公开(公告)日：2018-07-20
申请号：CN201810125980.6
申请日：2018-02-08
Abstract: 本发明提供一种基于pOp/LhG二元表达系统的外源基因清除技术基础载体及其制备方法和应用。针对原本只能应用于无性繁殖作物的外源基因清除技术，改进外源基因清除技术的基础载体，采用效应载体与激活载体组成的双载体形式，将效应载体和激活载体分别作用于不同亲本。效应载体包括标记基因表达框1、重组酶识别序列和重组酶表达框；激活载体包括标记基因表达框2、重组酶识别序列和激活表达框；分别含有效应载体的和含有激活载体的两亲本杂交时，实现特定组织和/或时期中将全部外源基因的清除，使该技术能够应用于有性繁殖作物中的异交繁殖作物，生物安全性高，具有良好的研究和应用前景。
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公开(公告)号：CN111471707A
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN202010208056.1
申请日：2020-03-23
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种延缓森林草莓叶片衰老的载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓细胞分裂素受体基因FveHK4的RNA干扰片段，构建得到该基因的植物抑制表达载体GN2300-FveHK4，转入二倍体森林草莓‘Hawaii 4’中，获得FveHK4基因的RNAi表达干扰株系，该株系的营养生长与野生型没有明显差异。在黑暗条件下，FveHK4-RNAi离体叶片的衰老与野生型相比明显延缓，表明遗传转化FveHK4干扰载体的森林草莓转基因株系叶片衰老速度变缓，功能期延长。本发明对延缓草莓叶片衰老，提高叶片的光合生产量进而提高草莓产量具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN116875670A
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN202310765256.0
申请日：2023-06-27
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于突变育种技术领域，具体涉及一种基于高通量测序的突变体筛选方法。将待测突变群体划分为不超过250个杂合或500个纯合个体的检测池，利用野生型DNA对检测池DNA进行3倍以上稀释，获得对应稀释池DNA。对检测池和对应稀释池进行目标片段的相同引物PCR扩增及产物高通量测序，将测序所得序列拼接至野生型参考序列，计算每个位点在检测池和对应稀释池中的变异核苷酸频率(NVF)及两者间的比值。若一个位点处的NVF比值>1.5，且其检测池和稀释池中的NVF均大于对应理论NVF值的80％，则该位点存在突变，而该检测池中存在突变体。本发明准确灵敏、简便易行，且将杂合突变体筛选分辨率从现有约1/100至少提高至1/250，对于提高大突变群体的突变体筛选效率具有重要意义。
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公开(公告)号：CN111471707B
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202010208056.1
申请日：2020-03-23
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种延缓森林草莓叶片衰老的载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓细胞分裂素受体基因FveHK4的RNA干扰片段，构建得到该基因的植物抑制表达载体GN2300‑FveHK4，转入二倍体森林草莓‘Hawaii 4’中，获得FveHK4基因的RNAi表达干扰株系，该株系的营养生长与野生型没有明显差异。在黑暗条件下，FveHK4‑RNAi离体叶片的衰老与野生型相比明显延缓，表明遗传转化FveHK4干扰载体的森林草莓转基因株系叶片衰老速度变缓，功能期延长。本发明对延缓草莓叶片衰老，提高叶片的光合生产量进而提高草莓产量具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN109735538B
公开(公告)日：2022-06-21
申请号：CN201811610375.4
申请日：2018-12-27
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/12 , A01H6/74
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种提高草莓叶片再生效率的载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓细胞分裂素受体基因FveHK2的RNA干扰片段，构建得到森林草莓细胞分裂素受体基因FveHK2的植物抑制表达载体GN2300‑FveHK2，进而转染转基因工程菌，转入二倍体森林草莓‘Hawaii 4’中，获得FveHK2基因的RNAi表达干扰株系，在离体叶片组织培养条件下，FveHK2基因抑制表达系的出芽时间早于野生型，出芽率显著高于野生型，表明遗传转化FveHK2干扰载体的森林草莓转基因株系叶片的再生能力显著提高。本发明对草莓叶片再生及转化效率的提高具有重要意义。
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