公开(公告)号：CN117568279A

公开(公告)日：2024-02-20

申请号：CN202310729246.1

申请日：2023-06-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  赵丹 ,  董雨豪 ,  李首纲 ,  刘佳宁 ,  常宇昕 ,  彭一璇

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明提供H3N2犬流感病毒NA蛋白真核表达稳转细胞株、其建立方法及应用，具体为稳定表达NAGFP融合蛋白的人肺癌稳转细胞A549NAGFP。在H3N2犬流感病毒的NA基因的C端融合GFP蛋白基因，并将融合基因与真核表达载体pcDNA3.1（+）连接，构建pcDNA3.1NAGFP重组表达质粒，同时构建pcDNA3.1GFP对照质粒，分别将质粒转染进入真核细胞A549，经G418筛选并亚克隆得到人肺癌稳转细胞A549NAGFP与A549GFP。对稳转细胞株表达产物进行亚细胞定位及蛋白功能验证，结果表明GFP蛋白主要定位于细胞核，NAGFP融合蛋白主要定位于细胞质，并且经Western Blot验证NAGFP融合蛋白能够与GFP标签抗体及H3N2犬流感病毒全病毒抗体结合，具有良好的反应原性。