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公开(公告)号：CN116665779B
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202310368843.6
申请日：2023-04-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: G16B30/10 , G16B45/00 , C12N15/113 , C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/64 , A61K31/7088 , A61P31/14 , A61P31/16
Abstract: 本发明公开了一种筛选家禽RNA病毒源siRNA的方法及其应用。本发明筛选家禽病毒源siRNA方法是基于NCBI GEO数据库中GSE数据集的小RNA与相应参考文献的病毒毒株序列进行比对。其次，通过基因组可视化软件IGV比对可知，IBVM41病毒源siRNA富集区为IBV M41 NSP10siRNA富集区序列。我们将IBVM41 NSP10siRNA富集区序列克隆至能高效表达siRNA的pSilencer4.1载体中，构建成PS‑M10质粒。最后，将PS‑M10质粒转染至巨噬细胞，再进行IBVM41感染试验，荧光定量PCR以及蛋白质印迹结果表明，PS‑M10可高效抑制IBV M41的复制，限制病毒的增殖。
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公开(公告)号：CN118165990A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410588735.4
申请日：2024-05-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了基于PRRSV基因组dsRNA的siRNA重组质粒及其构建方法和应用。通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组产生的siRNA基因片段进行测序分析，获得能够大量产生siRNA的片段，将得到的基因片段构建至真核表达载体质粒，制备重组质粒及其在猪繁殖与呼吸综合征的防治方面的应用，经实验证明，将重组质粒转染猪肺泡巨噬细胞后感染PRRSV，细胞中PRRSV复制量显著降低，PRRSV病毒的增殖被抑制。在使用仔猪进行的攻毒保护实验中，免疫组实验猪血液中具有更低的病毒载量，且实验组仔猪全部存活，攻毒对照组有实验猪死亡。因此，该重组质粒可作为种猪场净化PRRSV的候选物。
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公开(公告)号：CN118165990B
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410588735.4
申请日：2024-05-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了基于PRRSV基因组dsRNA的siRNA重组质粒及其构建方法和应用。通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组产生的siRNA基因片段进行测序分析，获得能够大量产生siRNA的片段，将得到的基因片段构建至真核表达载体质粒，制备重组质粒及其在猪繁殖与呼吸综合征的防治方面的应用，经实验证明，将重组质粒转染猪肺泡巨噬细胞后感染PRRSV，细胞中PRRSV复制量显著降低，PRRSV病毒的增殖被抑制。在使用仔猪进行的攻毒保护实验中，免疫组实验猪血液中具有更低的病毒载量，且实验组仔猪全部存活，攻毒对照组有实验猪死亡。因此，该重组质粒可作为种猪场净化PRRSV的候选物。
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公开(公告)号：CN118441099A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410575456.4
申请日：2024-05-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种检测牛病毒性腹泻病毒的引物探针组合、冻干小球及其应用。所述引物探针组合包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针；或所述引物探针组合包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的探针。所述冻干小球包括上述引物探针组合、荧光定量PCR溶液和冻干保护溶液。本发明的检测牛病毒性腹泻病毒的引物探针组合结合冻干小球技术，用于检测牛病毒性腹泻病毒灵敏度高，特异性强，且冻干小球可常温保存，大大降低了运输和保存成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117512225B
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202410010654.6
申请日：2024-01-04
Applicant: 南京农业大学三亚研究院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于同时检测猪流行性腹泻病毒和猪德尔塔冠状病毒并对猪流行性腹泻病毒进行GⅠ、GⅡ分型检测的实时荧光定量qPCR冻干小球检测试剂盒及其应用。针对这两种病原的检测特异性强，灵敏度高，重复性好，能够准确诊断猪群常见冠状腹泻病毒的感染情况。此外，冻干小球形式的诊断试剂较液体诊断试剂稳定性好，可常温保存和运输，大大降低了运输成本，复溶操作简单。
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公开(公告)号：CN116676422A
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202310533977.9
申请日：2023-05-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种检测牛病毒性腹泻病毒的引物探针组合、冻干小球及其应用。所述引物探针组合包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针。所述冻干小球包括上述引物探针组合、荧光定量PCR溶液和冻干保护溶液。本发明的检测牛病毒性腹泻病毒的引物探针组合结合冻干小球技术，用于检测牛病毒性腹泻病毒灵敏度高，特异性强，且冻干小球可常温保存，大大降低了运输和保存成本。
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公开(公告)号：CN117512225A
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202410010654.6
申请日：2024-01-04
Applicant: 南京农业大学三亚研究院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于同时检测猪流行性腹泻病毒和猪德尔塔冠状病毒并对猪流行性腹泻病毒进行GⅠ、GⅡ分型检测的实时荧光定量qPCR冻干小球检测试剂盒及其应用。针对这两种病原的检测特异性强，灵敏度高，重复性好，能够准确诊断猪群常见冠状腹泻病毒的感染情况。此外，冻干小球形式的诊断试剂较液体诊断试剂稳定性好，可常温保存和运输，大大降低了运输成本，复溶操作简单。
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公开(公告)号：CN116665779A
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310368843.6
申请日：2023-04-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: G16B30/10 , G16B45/00 , C12N15/113 , C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/64 , A61K31/7088 , A61P31/14 , A61P31/16
Abstract: 本发明公开了一种筛选家禽RNA病毒源siRNA的方法及其应用。本发明筛选家禽病毒源siRNA方法是基于NCBI GEO数据库中GSE数据集的小RNA与相应参考文献的病毒毒株序列进行比对。其次，通过基因组可视化软件IGV比对可知，IBVM41病毒源siRNA富集区为IBV M41 NSP10siRNA富集区序列。我们将IBVM41 NSP10siRNA富集区序列克隆至能高效表达siRNA的pSilencer4.1载体中，构建成PS‑M10质粒。最后，将PS‑M10质粒转染至巨噬细胞，再进行IBVM41感染试验，荧光定量PCR以及蛋白质印迹结果表明，PS‑M10可高效抑制IBV M41的复制，限制病毒的增殖。
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公开(公告)号：CN116426527A
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310370313.5
申请日：2023-04-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/66 , G16B30/10 , G16B45/00 , A61K31/7088 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了通过筛选得到鸡传染性法氏囊病毒的siRNA基因库，并将该数据库与鸡传染性法氏囊病毒基因组比对得到一段siRNA富集区的基因片段的方法。我们发现IBDV的基因组上siRNA富集区可以高效产生siRNA并能够作为鸡传染性法氏囊病预防与治疗的应用，所述应用包括：使用pcDNA3.1和PSilence4.1商品质粒构建包含IBDVsiRNA富集区片段的重组质粒。经实验证明，使用重组质粒处理DF1细胞后，细胞中IBDV复制量显著降低，IBDV病毒的增殖被抑制。在使用雏鸡进行的动物保护实验中也能得到了相同结论。因此，该重组质粒可作为预防/治疗鸡传染性法氏囊病的候选疫苗。
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