公开(公告)号：CN101481695B

公开(公告)日：2010-12-15

申请号：CN200810198949.1

申请日：2008-10-07

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  郑穗平 ,  韩振林 ,  黄登峰 ,  王小宁

IPC: C12N15/55 ,  C12R1/84 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种改良的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在酵母展示中的应用。改良的米黑根毛霉脂肪酶基因序列为SEQ.ID.NO2。含有所述基因的重组载体pMD18-T-RML，RML是指脂肪酶基因；携带该质粒的菌株Escherichia coli TOP10/pMD18-T-RML保藏号为：CCTCC M208136。本发明将该基因转入到毕赤酵母宿主菌中，实现米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的展示表达，提供的毕赤酵母菌能有效展示米黑根毛霉脂肪酶，该脂肪酶能广泛应用于制造脂肪酸甲酯、己酸乙酯、具有不同熔点且不含各式脂肪酸的三甘酯以及一些“重构脂”等。

公开(公告)号：CN101792721B

公开(公告)日：2012-02-01

申请号：CN200910192910.3

申请日：2009-09-30

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  金子 ,  黄登峰 ,  郑穗平

IPC: C12N1/19 ,  C12P7/62 ,  C12R1/84

CPC classification number: Y02P20/584

Abstract: 本发明公开了表面展示CALB的毕赤酵母工程菌及催化合成短链芳香酯的方法。该方法将表面展示CALB的毕赤酵母工程菌菌株摇瓶发酵，收获菌体，真空冷冻干燥24h以上，制成全细胞酶制剂；采用短链酸和短链醇为原料，以全细胞酶制剂为催化剂，以能够溶解短链酸和短链醇的液态物质为溶剂，进行酯化反应，得到短链芳香酯产品；酯化反应温度为20-60℃；反应物中全细胞酶制剂在反应体系中的浓度为10-40g/L，反应时间1-6h。该方法较以往报道反应时间大大缩短、产率高达98％、连续操作稳定性好，且反应后全细胞催化剂经离心回收即可重复利用，大大降低生产成本。

公开(公告)号：CN101565713B

公开(公告)日：2011-07-06

申请号：CN200910039860.5

申请日：2009-06-01

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  苏国栋 ,  郑穗平 ,  黄登峰

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P7/64 ,  C12P7/62 ,  C12P19/00 ,  C12R1/84 ,  C12R1/72

CPC classification number: Y02E50/13

Abstract: 本发明南极假丝酵母脂肪酶B基因及其在酵母展示中的应用。改良的南极假丝酵母B其编码的蛋白与野生型南极假丝酵母脂肪酶蛋白在氨基酸水平具有相同的功能，其酶的耐热能力为50-80℃，半衰期为3h-24h，核苷酸序列在中度严谨条件下与SEQ.ID.NO2从核苷酸第1-978位杂交。携带该质粒的大肠杆菌DH5α/pUC57-CALB(Escherichia coliDH5α/pUC57-CALB)的保藏号为：CCTCC M 209081。将其基因转入到毕赤酵母宿主菌中，实现南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母中的高效展示表达，提供的毕赤酵母菌能有效展示南极假丝酵母脂肪酶B能广泛应用于合成己酸乙酯、糖脂，具有不同熔点且不含各式脂肪酸的三甘酯以及一些“重构脂”等。

公开(公告)号：CN101792721A

公开(公告)日：2010-08-04

申请号：CN200910192910.3

申请日：2009-09-30

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  金子 ,  黄登峰 ,  郑穗平

IPC: C12N1/19 ,  C12P7/62 ,  C12R1/84

CPC classification number: Y02P20/584

Abstract: 本发明公开了表面展示CALB的毕赤酵母工程菌及催化合成短链芳香酯的方法。该方法将表面展示CALB的毕赤酵母工程菌菌株摇瓶发酵，收获菌体，真空冷冻干燥24h以上，制成全细胞酶制剂；采用短链酸和短链醇为原料，以全细胞酶制剂为催化剂，以能够溶解短链酸和短链醇的液态物质为溶剂，进行酯化反应，得到短链芳香酯产品；酯化反应温度为20-60℃；反应物中全细胞酶制剂在反应体系中的浓度为10-40g/L，反应时间1-6h。该方法较以往报道反应时间大大缩短、产率高达98％、连续操作稳定性好，且反应后全细胞催化剂经离心回收即可重复利用，大大降低生产成本。

公开(公告)号：CN101481695A

公开(公告)日：2009-07-15

申请号：CN200810198949.1

申请日：2008-10-07

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  郑穗平 ,  韩振林 ,  黄登峰 ,  王小宁

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及一种改良的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在酵母展示中的应用。改良的米黑根毛霉脂肪酶基因序列为SEQ.ID.No2。含有所述基因的重组载体pMD18－T－RML，RML是指脂肪酶基因；携带该质粒的菌株Escherichia coli TOP10/pMD18－T－RML保藏号为：CCTCC M208136。本发明将该基因转入到毕赤酵母宿主菌中，实现米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的展示表达，提供的毕赤酵母菌能有效展示米黑根毛霉脂肪酶，该脂肪酶能广泛应用于制造脂肪酸甲酯、己酸乙酯、具有不同熔点且不含各式脂肪酸的三甘酯以及一些“重构脂”等。

公开(公告)号：CN101285078A

公开(公告)日：2008-10-15

申请号：CN200810028631.9

申请日：2008-06-10

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  潘志友 ,  郑穗平 ,  黄登峰

IPC: C12P7/62 ,  C12N9/20 ,  C12N15/57 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成己酸乙酯的方法，该方法包括全细胞酶制剂的生产和己酸乙酯的合成两个步骤，是将脂肪酶基因克隆到毕赤酵母表面展示载体pKFS中构建毕赤酵母表面展示表达载体pKFS－lipase，pKFS－lipase经线性化后转化毕赤酵母宿主菌，筛选获得在毕赤酵母表面展示活性酶蛋白的重组酵母基因工程菌，工程菌经摇瓶发酵，收获菌体真空冷冻干燥24h以上制成全细胞酶制剂；然后采用己酸和乙醇为原料，在表面展示有脂肪酶的毕赤酵母全细胞酶制剂作为生物催化剂的作用下发生酯化反应，得到己酸乙酯产品。该方法反应时间短、产率高、操作稳定性好，且反应后离心收集菌体即可重复利用，大大降低生产成本。

公开(公告)号：CN101565713A

公开(公告)日：2009-10-28

申请号：CN200910039860.5

申请日：2009-06-01

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  苏国栋 ,  郑穗平 ,  黄登峰

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P7/64 ,  C12P7/62 ,  C12P19/00 ,  C12R1/72 ,  C12R1/84

CPC classification number: Y02E50/13

Abstract: 本发明南极假丝酵母脂肪酶B基因及其在酵母展示中的应用。改良的南极假丝酵母B其编码的蛋白与野生型南极假丝酵母脂肪酶蛋白在氨基酸水平具有相同的功能，其酶的耐热能力为50－80℃，半衰期为3h－24h，核苷酸序列在中度严谨条件下与SEQ.ID.NO2从核苷酸第1－978位杂交。携带该质粒的大肠杆菌DH5α/pUC57－CALB(Escherichia coliDH5α/pUC57－CALB)的保藏号为：CCTCC M 209081。将其基因转入到毕赤酵母宿主菌中，实现南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母中的高效展示表达，提供的毕赤酵母菌能有效展示南极假丝酵母脂肪酶B能广泛应用于合成己酸乙酯、糖脂，具有不同熔点且不含各式脂肪酸的三甘酯以及一些“重构脂”等。