公开(公告)号：CN101285078A

公开(公告)日：2008-10-15

申请号：CN200810028631.9

申请日：2008-06-10

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  潘志友 ,  郑穗平 ,  黄登峰

IPC: C12P7/62 ,  C12N9/20 ,  C12N15/57 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成己酸乙酯的方法，该方法包括全细胞酶制剂的生产和己酸乙酯的合成两个步骤，是将脂肪酶基因克隆到毕赤酵母表面展示载体pKFS中构建毕赤酵母表面展示表达载体pKFS－lipase，pKFS－lipase经线性化后转化毕赤酵母宿主菌，筛选获得在毕赤酵母表面展示活性酶蛋白的重组酵母基因工程菌，工程菌经摇瓶发酵，收获菌体真空冷冻干燥24h以上制成全细胞酶制剂；然后采用己酸和乙醇为原料，在表面展示有脂肪酶的毕赤酵母全细胞酶制剂作为生物催化剂的作用下发生酯化反应，得到己酸乙酯产品。该方法反应时间短、产率高、操作稳定性好，且反应后离心收集菌体即可重复利用，大大降低生产成本。

公开(公告)号：CN106191096B

公开(公告)日：2020-01-10

申请号：CN201610580613.6

申请日：2016-07-21

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  靳坤 ,  潘志友 ,  郑穗平 ,  梁书利

IPC: C12N15/80 ,  C12N9/20 ,  C12P13/00 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了组成型表达黑曲霉表面展示脂肪酶的重组质粒及其应用。本发明重组质粒是以黑曲霉表面展示载体pCALB‑C为出发质粒，将诱导型启动子葡糖淀粉酶启动子Pgla替换为组成型启动子PgpdA；得到重组质粒pGpdA‐CALB‐CwpA；该重组质粒转化大肠杆菌，得到大肠杆菌(Escherrichia coli)DH5α携带质粒/pGpdA‐CALB‐CwpA；重组质粒转化黑曲霉原生质体，获得在黑曲霉表面展示脂肪酶CALB的工程菌AN‐GpdA‐CALB‐CwpA，该工程菌经发酵培养后，离心收集菌丝体并冷冻干燥后，获得黑曲霉表面展示CALB全细胞催化剂，可用于甘油磷脂酰胆碱的高效合成。

公开(公告)号：CN106191096A

公开(公告)日：2016-12-07

申请号：CN201610580613.6

申请日：2016-07-21

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林影 ,  韩双艳 ,  靳坤 ,  潘志友 ,  郑穗平 ,  梁书利

IPC: C12N15/80 ,  C12N9/20 ,  C12P13/00 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了组成型表达黑曲霉表面展示脂肪酶的重组质粒及其应用。本发明重组质粒是以黑曲霉表面展示载体pCALB-C为出发质粒，将诱导型启动子葡糖淀粉酶启动子Pgla替换为组成型启动子PgpdA；得到重组质粒pGpdA‐CALB‐CwpA；该重组质粒转化大肠杆菌，得到大肠杆菌(Escherrichia coli)DH5α携带质粒/pGpdA‐CALB‐CwpA；重组质粒转化黑曲霉原生质体，获得在黑曲霉表面展示脂肪酶CALB的工程菌AN‐GpdA‐CALB‐CwpA，该工程菌经发酵培养后，离心收集菌丝体并冷冻干燥后，获得黑曲霉表面展示CALB全细胞催化剂，可用于甘油磷脂酰胆碱的高效合成。