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公开(公告)号:CN108642026A
公开(公告)日:2018-10-12
申请号:CN201810472705.1
申请日:2018-05-17
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种偏甘油酯脂肪酶突变体,是对来源于青霉菌的偏甘油酯脂肪酶进行定点突变而得,其突变位点为下述任意一种或两种以上:(1)该蛋白84位的酪氨酸突变为精氨酸;(2)该蛋白209位的甲硫氨酸突变为丙氨酸;(3)该蛋白260位的异亮氨酸突变为谷氨酸或精氨酸。本发明突变体大幅提高了偏甘油酯脂肪酶的热稳定性和过氧化氢耐受性。另外,相较于野生型偏甘油酯脂肪酶,本发明所得突变体催化酯类进行环氧化反应的能力显著提高,目标产物得率高,在工业应用上具有显著优势。
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公开(公告)号:CN108220269A
公开(公告)日:2018-06-29
申请号:CN201711471839.3
申请日:2017-12-29
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N9/20
Abstract: 本发明公开了一种耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体及其制备方法,该晶体为短棱柱状形貌,其空间结构为精细三维结构,结构中含有440个氨基酸,在每个不对称单元中含有3个分子,每个分子含有21个α螺旋结构和6个β折叠结构;结构中具有α=β=γ=90°晶包元,晶体的蛋白空间群为P41212。本发明提供的耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体为解析脂肪酶AflB分子结构提供必要条件,为后续蛋白质工程提高脂肪酶AflB性能提供基础。
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公开(公告)号:CN108531522B
公开(公告)日:2021-09-21
申请号:CN201810193360.6
申请日:2018-03-09
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12P7/64
Abstract: 本发明属于生物工程领域,公开了一种酶法催化合成单甘酯的方法,具体是将甘油与脂肪酸按摩尔比为1:0.1~1:1进行混合,以固定化单甘酯脂肪酶作为催化剂,在温度为40‑70℃、搅拌速度为200~600rpm的条件下反应,利用真空泵不断除去反应过程中产生的水分,最后通过离心分离,得到单甘酯产物。本发明采用单甘酯脂肪酶作为催化剂酯化合成不饱和脂肪酸甘油单酯,反应的过程中不产生其他甘油酯副产物,简化单甘酯产物分离成本,同时具有减少能耗和环境友好,反应条件温和,转化效率高,产物纯度高,酶活损失少等优点,适合大规模推广应用。
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公开(公告)号:CN108531522A
公开(公告)日:2018-09-14
申请号:CN201810193360.6
申请日:2018-03-09
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12P7/64
Abstract: 本发明属于生物工程领域,公开了一种酶法催化合成单甘酯的方法,具体是将甘油与脂肪酸按摩尔比为1:0.1~1:1进行混合,以固定化单甘酯脂肪酶作为催化剂,在温度为40-70℃、搅拌速度为200~600rpm的条件下反应,利用真空泵不断除去反应过程中产生的水分,最后通过离心分离,得到单甘酯产物。本发明采用单甘酯脂肪酶作为催化剂酯化合成不饱和脂肪酸甘油单酯,反应的过程中不产生其他甘油酯副产物,简化单甘酯产物分离成本,同时具有减少能耗和环境友好,反应条件温和,转化效率高,产物纯度高,酶活损失少等优点,适合大规模推广应用。
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公开(公告)号:CN108504618B
公开(公告)日:2020-08-18
申请号:CN201810526361.8
申请日:2018-05-29
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种表达R构型选择性的脂肪酶的重组菌及其应用,将R构型选择性的脂肪酶基因插入pET28a质粒的多克隆位点得到的重组质粒;再将所述重组质粒转化大肠杆菌SHuffle T7,得到重组菌;所述R构型选择性的脂肪酶基因为如下1)或2)的DNA序列:1)序列表中SEQ ID NO.2所示的DNA序列;2)与1)限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码具有酯水解酶活性的蛋白的DNA序列。本发明重组的脂肪酶具有较高R‑构型立体选择性和催化活力,在较高温条件下酶活保留大于85%,可用于拆分外消旋2‑芳基丙酸甲酯类物质,获取光学纯的S‑型2‑芳基丙酸甲酯类物质。
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公开(公告)号:CN108504643A
公开(公告)日:2018-09-07
申请号:CN201810550076.X
申请日:2018-05-31
Applicant: 华南理工大学 , 广州华粤营养创制研究院有限公司
Abstract: 本发明属于酶工程技术领域,公开了一种来源于米曲霉的偏甘油酯脂肪酶及其制备方法和晶体结构,其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。所述偏甘油酯脂肪酶晶体结构由2个不对称单体组成,分别为:单体A和单体B;晶体结构参数为:空间群P1211;晶胞参数: 每个单体有β折叠和α螺旋,构成了典型的丝氨酸水解酶α/β折叠结构,并由Ser153、Asp260,His268构成的催化三联体形成活性中心。本发明提供的偏甘油酯脂肪酶的三维结构,有助于利用蛋白质工程技术改造酶分子,更高效地获得满足工业应用需求的酶蛋白变异体,如底物选择性,热稳定性及催化活力等性能改善。
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公开(公告)号:CN108504618A
公开(公告)日:2018-09-07
申请号:CN201810526361.8
申请日:2018-05-29
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种表达R构型选择性的脂肪酶的重组菌及其应用,将R构型选择性的脂肪酶基因插入pET28a质粒的多克隆位点得到的重组质粒;再将所述重组质粒转化大肠杆菌SHuffle T7,得到重组菌;所述R构型选择性的脂肪酶基因为如下1)或2)的DNA序列:1)序列表中SEQ ID NO.2所示的DNA序列;2)与1)限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码具有酯水解酶活性的蛋白的DNA序列。本发明重组的脂肪酶具有较高R-构型立体选择性和催化活力,在较高温条件下酶活保留大于85%,可用于拆分外消旋2-芳基丙酸甲酯类物质,获取光学纯的S-型2-芳基丙酸甲酯类物质。
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公开(公告)号:CN108690838B
公开(公告)日:2021-09-21
申请号:CN201810540961.X
申请日:2018-05-30
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明属于酶工程技术领域,具体公开了一种海洋来源单甘酯脂肪酶及其晶体结构和制备方法,所述单甘酯脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述脂肪酶晶体一个晶格含有6个蛋白分子,所述晶体每个单分子含有9个α螺旋结构和9个β折叠片。本发明提供的单甘酯脂肪酶的晶体结构信息可以用以更高效地获得提高底物选择性、热稳定性及催化效率的酶变异体,满足工业化应用的要求。
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公开(公告)号:CN108220269B
公开(公告)日:2021-07-20
申请号:CN201711471839.3
申请日:2017-12-29
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N9/20
Abstract: 本发明公开了一种耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体及其制备方法,该晶体为短棱柱状形貌,其空间结构为精细三维结构,结构中含有440个氨基酸,在每个不对称单元中含有3个分子,每个分子含有21个α螺旋结构和6个β折叠结构;结构中具有α=β=γ=90°晶包元,晶体的蛋白空间群为P41212。本发明提供的耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体为解析脂肪酶AflB分子结构提供必要条件,为后续蛋白质工程提高脂肪酶AflB性能提供基础。
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公开(公告)号:CN108642026B
公开(公告)日:2020-06-19
申请号:CN201810472705.1
申请日:2018-05-17
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种偏甘油酯脂肪酶突变体,是对来源于青霉菌的偏甘油酯脂肪酶进行定点突变而得,其突变位点为下述任意一种或两种以上:(1)该蛋白84位的酪氨酸突变为精氨酸;(2)该蛋白209位的甲硫氨酸突变为丙氨酸;(3)该蛋白260位的异亮氨酸突变为谷氨酸或精氨酸。本发明突变体大幅提高了偏甘油酯脂肪酶的热稳定性和过氧化氢耐受性。另外,相较于野生型偏甘油酯脂肪酶,本发明所得突变体催化酯类进行环氧化反应的能力显著提高,目标产物得率高,在工业应用上具有显著优势。
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