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公开(公告)号:CN114231664B
公开(公告)日:2023-07-28
申请号:CN202111446874.6
申请日:2021-11-30
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6818 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供一种赤点斑石斑鱼神经坏死病毒RGNNV检测试剂盒及其检测方法,包括RGNNV引物组,所述引物组包括正向引物和反向引物,正向引物序列如SEQ ID NO.1所示,反向引物序列如SEQ ID NO.2所示;还包括在正向引物前段加上T7启动子序列,所述T7启动子序列如SEQ ID NO.3所示,得到添加了T7启动子序列的正向引物序列如SEQ ID NO.4所示。本发明检测方法,包括以下步骤:S1.RGNNV病毒RNA的提取、病毒RNA逆转录、核酸扩增、体外转录;S2.CRISPR‑Cas13a检测体系的建立;S3.将待测样品RNA添加到步骤S2得到的混合物中;S4.检测荧光值。本发明检测方法特异性好、灵敏度高、重复性好,准确度高,可快速地检测RGNNV检测成本低,具有较高的应用价值和推广前景。
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公开(公告)号:CN114231664A
公开(公告)日:2022-03-25
申请号:CN202111446874.6
申请日:2021-11-30
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6818 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供一种赤点斑石斑鱼神经坏死病毒RGNNV检测试剂盒及其检测方法,包括RGNNV引物组,所述引物组包括正向引物和反向引物,正向引物序列如SEQ ID NO.1所示,反向引物序列如SEQ ID NO.2所示;还包括在正向引物前段加上T7启动子序列,所述T7启动子序列如SEQ ID NO.3所示,得到添加了T7启动子序列的正向引物序列如SEQ ID NO.4所示。本发明检测方法,包括以下步骤:S1.RGNNV病毒RNA的提取、病毒RNA逆转录、核酸扩增、体外转录;S2.CRISPR‑Cas13a检测体系的建立;S3.将待测样品RNA添加到步骤S2得到的混合物中;S4.检测荧光值。本发明检测方法特异性好、灵敏度高、重复性好,准确度高,可快速地检测RGNNV检测成本低,具有较高的应用价值和推广前景。
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公开(公告)号:CN117248032A
公开(公告)日:2023-12-19
申请号:CN202311053311.X
申请日:2023-08-21
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种基于Crispr/Cas12a系统检测入侵物种的试剂盒,所述试剂盒包括CRISPR‑Cas12a检测体系和含有靶标的目的片段;其中所述CRISPR‑Cas12a检测体系包括Cas12a蛋白、入侵物种的特异性gRNA、淬灭荧光DNA报告探针、检测缓冲液和ddH2O,所述含有靶标的目的片段采用引物扩增获得。还公开了上述利用上述试剂盒检测入侵物种的方法,以及上述试剂盒在制备检测入侵物种产品中的应用。本发明检测试剂盒及方法设计了入侵物种特异性gRNA,可与入侵物种的保守序列特异性形成互补双链,与其他入侵物种不存在交叉反应,提高了入侵物种检测的特异性。
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