公开(公告)号：CN111662904A

公开(公告)日：2020-09-15

申请号：CN202010324328.4

申请日：2020-04-22

Applicant: 华中科技大学同济医学院附属同济医院

Inventor： 汪辉 ,  马丁 ,  任慈 ,  丁文成 ,  李晓敏 ,  熊劲风

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及一种靶向高危型HPV高频整合位点处人基因组序列的sgRNA和HaCaT细胞模型的制备。本发明针对HPV16在13q22和HPV18在8q24区域的整合位点分别设计特异性的sgRNA，并得到sgRNA双链DNA，将sgRNA双链引物分别与CRISPR/Cas9载体连接获得sgRNA表达载体，筛选得到sgRNA打靶质粒；运用克隆构建及PCR扩增分别合成含有高危型人乳头状瘤病毒HPV基因的线性Donor片段，与sgRNA打靶质粒共转染HaCaT细胞，获得HPV基因定点整合的HaCaT细胞模型。本发明运用CRISPR/Cas技术建立的HPV16及HPV18在人基因组高频位点整合的细胞模型，促进了HaCaT细胞的生长增殖，为高危型HPV整合在宫颈癌发病中的机制研究提供新的方法。