公开(公告)号：CN108004264A

公开(公告)日：2018-05-08

申请号：CN201711340835.1

申请日：2017-12-14

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 闫云君 ,  焦梁成 ,  周清华 ,  宿智新 ,  乔阳歌 ,  杨凯欣

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了毕赤酵母基因敲除和抗性基因回收载体及构建方法与运用，属于微生物基因工程领域。本发明毕赤酵母基因敲除的模板载体包括毕赤酵母甲醇型启动子AOX1调控的mazf基因表达盒以及两端的lox71和lox66特异性重组酶识别位点和博来霉素抗性基因表达盒；本发明毕赤酵母基因抗性基因回收载体包括利用毕赤酵母甲醇型启动子AOX1调控的mazf基因表达盒、利用GAP启动子组成型表达的cre基因表达盒和HygB抗性基因表达盒。本发明极大地提高了毕赤酵母基因的敲除效率。本发明提供了基因敲除后抗生素标记回收的方法，为多基因的高效敲除提供了极大的便利，且敲除的效率高，使用的同源臂短。

公开(公告)号：CN108004264B

公开(公告)日：2020-09-08

申请号：CN201711340835.1

申请日：2017-12-14

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 闫云君 ,  焦梁成 ,  周清华 ,  宿智新 ,  乔阳歌 ,  杨凯欣

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了毕赤酵母基因敲除和抗性基因回收载体及构建方法与运用，属于微生物基因工程领域。本发明毕赤酵母基因敲除的模板载体包括毕赤酵母甲醇型启动子AOX1调控的mazf基因表达盒以及两端的lox71和lox66特异性重组酶识别位点和博来霉素抗性基因表达盒；本发明毕赤酵母基因抗性基因回收载体包括利用毕赤酵母甲醇型启动子AOX1调控的mazf基因表达盒、利用GAP启动子组成型表达的cre基因表达盒和HygB抗性基因表达盒。本发明极大地提高了毕赤酵母基因的敲除效率。本发明提供了基因敲除后抗生素标记回收的方法，为多基因的高效敲除提供了极大的便利，且敲除的效率高，使用的同源臂短。