公开(公告)号：CN109266593A

公开(公告)日：2019-01-25

申请号：CN201810970024.8

申请日：2018-08-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 张安定 ,  付磊 ,  韩丽 ,  项耀祖 ,  靳泽华

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  A61K39/102 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株及其构建方法和应用；所述禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株为在禽多杀性巴氏杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒电转入禽多杀性巴氏杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在42℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为禽多杀性巴氏杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。

公开(公告)号：CN109266593B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201810970024.8

申请日：2018-08-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 张安定 ,  付磊 ,  韩丽 ,  项耀祖 ,  靳泽华

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  A61K39/102 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株及其构建方法和应用；所述禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株为在禽多杀性巴氏杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒电转入禽多杀性巴氏杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在42℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为禽多杀性巴氏杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。