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公开(公告)号：CN117363761A
公开(公告)日：2024-01-09
申请号：CN202311342586.5
申请日：2023-10-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明供了基于MIRA‑LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法，所述引物探针组合包括一个引物对和一个探针，其中引物对序列如SEQ ID NO.1～2所示，探针序列如SEQ ID NO.3或4所示，该引物探针组合具有高灵敏性和特异性。采用该引物探针组合，本发明利用MIRA结合LFD技术提供了一种柑橘黄龙病菌的快速检测方法，实现了柑橘黄龙病的快速、灵敏、特异性、可视化诊断；而且该方法操作简便、省时高效、结果可靠，解决了传统检测技术耗时长、步骤繁琐等问题，检测过程不需要特殊的仪器设备，检测成本低，可应用于野外现场等特殊环境，对黄龙病菌田间早期检测与诊断具有重大意义。
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公开(公告)号：CN117363759A
公开(公告)日：2024-01-09
申请号：CN202311335823.5
申请日：2023-10-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了基于MIRA‑CRISPR/Cas12a快速检测柑橘黄龙病菌的检测方法和试剂盒，所述试剂盒包括MIRA引物对、2个crRNA分子和1个ssDNA荧光探针，所述检测方法为：先通过MIRA引物对待测样品进行扩增，CRISPR/Cas12a在crRNA的引导下识别MIRA扩增产物中特异性靶标，CRISPR/Cas12a、crRNA和靶标序列分子结合成复合物并切割检测体系内的ssDNA荧光探针，产生大量可被检测到的荧光信号。本发明采用特异性引物和探针，利用MIRA结合CRISPR/Cas12a实现对黄龙病菌的可视化检测，该方法具有操作简便，所需设备简单、便携，抗干扰能力强，耗时短等优点。而且本发明方法可突破实验室局限，能在1h内完成大量样品的现场检测，检测效率高，检测门槛低，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN108148793B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201810202554.8
申请日：2018-03-13
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种广谱抑菌活性的多粘芽孢杆菌DYr4.4及制备方法和应用，CCTCC M 2018023。步骤是：A、无菌环境下挑取菌株单菌落，接种于培养液，放置在恒温培养振荡器中，调节温度、转速，振荡培养；B、每瓶装发酵液，放置在大振幅恒温冷冻摇床中，振荡培养；C、配制培养液：依次加入罐中，封闭罐体，对培养液加热消毒，点燃酒精将接种口消毒，在酒精持续燃烧下倒入上步制备的2 L发酵液，调控搅拌机的转速；D、将发酵液过滤，在过滤后的发酵液中加入辅料轻质碳酸钙粉末，送入离心喷雾干燥塔内干燥，收集干粉。该菌在制备治疗或预防梨树锈病药物中的应用。该菌株的干粉发酵对梨锈病具有显著的防病效果，防效达到67.09%以上，显著抑制梨树提前落叶。
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公开(公告)号：CN108739385B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201810563170.9
申请日：2018-06-04
Applicant: 华中农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种砂梨叶片高效再生体系的建立方法及其应用，包括以下步骤：（1）取砂梨的带芽枝条进行消毒，将带叶芽的茎尖接种于继代培养基上生长，再将未感染苹果茎沟病毒（Apple stem grooving virus,ASGV）的离体植株叶片切成小块叶片；（2）将外植体叶片接种于再生培养基中暗处理后再转至光下培养，产生不定芽，所述的再生培养基以NN69营养液为基础，再添加3‑5mg/L 6‑BA+0.1‑0.2mg/L NAA+2.5g/L植物凝胶；（3）待不定芽长至0.5~1.2cm，将其侧芽切下，置于继代培养基上培养获得再生苗。上述方法获得的组培苗离体叶片为无菌叶片，可用于病菌致病性测定，不受季节限制，保障了试验结果成功率和准确性。
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公开(公告)号：CN108330089B
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201810202569.4
申请日：2018-03-13
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种广谱抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌HNt7及制备方法和应用，拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌HNt7，编号为CCTCC M 2018022。步骤是：A、无菌环境下挑取贝莱斯芽孢杆菌HNt7菌株单菌落，接种于培养基，调节温度，振荡培养；B、每瓶装发酵液，按照比例加入单菌落菌液，放置在大振幅恒温冷冻摇床中，振荡培养；C、拮抗菌的分离：用浓度的酒精浸泡，再用无菌水漂洗，于培养箱中暗培养，将长出来的细菌菌落转移至新的培养基上划线分离纯化单菌落；D、分离纯化后，获得贝莱斯芽孢杆菌HNt7。该菌在制备治疗或预防梨果实腐烂病药物中的应用。该菌株具有显著的防病效果，防效达到70.76%以上。经过贝莱斯芽孢杆菌HNt7喷施的梨树，显著抑制梨树提前落叶，有利于增强树势。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108486063A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810132721.6
申请日：2018-02-09
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/12 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明提供了一种杂交瘤细胞株Anti-CLas McAb2，其为小鼠杂交瘤细胞(Mus musculus Hybridoma)Anti-CLas McAb2，其保藏编号为CCTCC NO：C2017123。本发明还提供了所述杂交瘤细胞株的制备方法以及由所述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的重组黄龙病菌CLas McAb2的单克隆抗体。本发明还提供了重组黄龙病菌CLas McAb2的单克隆抗体的应用，包括检测试剂盒以及免疫胶体金检测试纸条，均利用重组黄龙病菌CLas McAb2的单克隆抗体的特异性检测。具有特异性好、抗干扰性强、成本低、应用广泛的优点，能快速有效地检测柑橘材料中存在的黄龙病菌。
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公开(公告)号：CN103421764A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310072994.3
申请日：2013-03-07
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明具体涉及一种真菌病毒双链RNA快速提取试剂盒及应用。包含细胞裂解液、核酸吸附液、核酸洗涤液和双链RNA琼脂糖凝胶电泳试剂。采用新的缓冲溶液系统，以硅膜替代纤维素粉作吸附介质，无需苯酚等有机试剂，通过细胞裂解液和核酸吸附液的反应将蛋白质及绝大部分DNA、多糖等杂质以化学沉淀方式除去，最后通过乙醇调整吸附条件使双链RNA有效结合于硅膜上并洗脱得到纯化的双链RNA。可从低至0.3克菌丝样品中制备高质量双链RNA。整个提取过程在1小时内。本发明省去了传统方法中有机试剂抽提及吸取上清的步骤，涉及过柱等操作均以离心方式完成，适用于大量样品的高通量处理。
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公开(公告)号：CN114717360B
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202210312967.8
申请日：2022-03-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了百合病毒的多重RT‑PCR检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒中包括序列如SEQ ID NO:1～18所示的能特异性检测九种百合病毒的引物对中的至少四对，所述九种百合病毒为CMV、LSV、PlAMV、LMoV、LCrV‑1、LAV‑1、LRoV‑1、LCaV‑1和LCaV‑2，配合优化后的检测条件，能实现9种病毒的同时检测，不仅准确率高、重复性好，而且耗时短、检测费用低廉。
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公开(公告)号：CN114921421B
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210492769.4
申请日：2022-05-07
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开一种从梨树腐烂病菌(Valsa pyri)中分离的新病毒，命名为Valsa pyri fusarivirus 1(VpFV1)，其核苷酸序列如SEQ ID 1，具有抑制宿主致病力的作用。采用对峙培养及RNA介导原生质体转染的方法，VpFV1均能克服菌丝不亲和性及不依赖菌丝可在细胞外存在，证实其传染不同种类腐烂病菌，引起宿主腐烂病菌株弱毒特性。通过将含有病毒VpFV1的弱毒性YN‑3菌株与无毒菌株对峙培养接种，以及YN‑3菌株发酵液与其他种类腐烂病菌菌株共培养接种梨离体枝条，致病力测定均显示经过YN‑3菌株及其发酵液处理后其他腐烂病菌菌株的致病力均出现下降，证明YN‑3菌株具有良好的生防潜力，可用于梨腐烂病害的生物防治。
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公开(公告)号：CN114793896A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210413414.1
申请日：2022-04-15
Applicant: 华中农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明属于植物培育技术领域，公开了一种诱导西洋梨离体叶片获得再生完整植株的方法，包括：无菌材料的获取、组培苗继代培养、叶片再生培养、再生芽继代培养、再生苗生根培养及生根苗移栽。鉴于梨叶片再生不具备一套再生体系可以在不同品种中套用，本发明通过大量实验去摸索和明确再生参数，建立了西洋梨品种Tosca的高效再生体系，且移栽成活率高，为引种Tosca资源保存、扩繁及其遗传转化研究奠定了基础，且具有实践生产意义。
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