公开(公告)号：CN114182024A

公开(公告)日：2022-03-15

申请号：CN202111504370.5

申请日：2021-12-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 沈志刚 ,  管赫赫 ,  于跃 ,  刘娅 ,  李波 ,  丁洋 ,  鲁子怡 ,  耿龙慧 ,  别汉晴 ,  胡晨昊

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种利用5S rRNA进行鱼类卵巢发育数量化的分子生物学方法，包括如下方法：获取特定鱼类雌鱼不同发育时期的卵巢样品，测定各发育时期的卵巢样品中5S rRNA占总RNA的比值以及初级卵母细胞体积占所有卵母细胞总体积的比值，构建5S rRNA占比与初级卵母细胞体积占比相关关系的公式，通过5S rRNA占比即可计算出初级卵母细胞体积占比，根据初级卵母细胞体积占比判断雌鱼卵巢发育的阶段。该方法解决了现阶段鱼类卵巢发育未建立有效数量化方法、卵巢发育判断标准不明确、主观性强、判断步骤繁琐、耗时长、取样致死等问题，可以通过非致死方式采取微量卵巢组织进行鱼类卵巢发育阶段的准确判断。

公开(公告)号：CN113287547B

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202110707590.1

申请日：2021-06-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 沈志刚 ,  胡晨昊 ,  别汉晴 ,  李波 ,  樊启学 ,  袁勇超

IPC: A01K61/10 ,  A23K50/80 ,  A23K20/174 ,  A23K10/16 ,  A23K10/20 ,  A23K20/184

Abstract: 本发明公开一种全雄加州鲈生产体系的建立方法，步骤是：（1）驯食：在加州鲈幼鱼性别分化前驯食成吃人工配合饲料；（2）性逆转：在性别分化敏感期利用激素处理加州鲈幼鱼，逆转为具有生殖功能的生理型雌鱼；（3）亲本维生素强化：经激素处理亲鱼，从其性成熟前3个月开始在饲料中添加维生素进行营养强化；（4）测交：生理型雌鱼与正常雄鱼配对产卵，通过其子代性别比例，推断激素处理亲本的性别遗传类型；（5）性逆转雌鱼扩群：用前述同样方法进行性激素处理，待测交结果出来时，将性逆转雌鱼子代保留作为繁殖亲本；（6）将性逆转子代经性激素处理的个体作为母本群体，将正常雄鱼作为父本群体，建立可持继生产全雄加州鲈苗种的生产体系。

公开(公告)号：CN113661948A

公开(公告)日：2021-11-19

申请号：CN202111037320.0

申请日：2021-09-06

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 沈志刚 ,  管赫赫 ,  刘娅 ,  于跃 ,  李波 ,  丁洋 ,  鲁子怡 ,  耿龙慧 ,  别汉晴 ,  胡晨昊

IPC: A01K61/10 ,  A23K50/80 ,  A23K20/116 ,  A23K20/184

Abstract: 本发明公开了一种自体受精获得全雌纯合黄颡鱼克隆系的方法，目的是通过黄颡鱼XX遗传型个体自身繁殖，即单个个体自身精卵结合，获得全雌性的纯合体黄颡鱼克隆系，为优良性状的保存和选育提供材料，步骤是：（1）将XX全雌黄颡鱼仔鱼养殖在27~34℃条件下，驯食人工配合饲料后，在饲料中同时添加来曲唑和甲基睾丸酮，投喂至精巢分化完成；（2）将XX个体养殖至性成熟，挑出腹部圆润并具有生殖突的个体；（3）将挑出的XX个体进行催产剂注射，达到效应时间后剖开鱼体腹部，挑出精巢与卵巢同时成熟的XX个体，取出精巢部分进行碾磨，将成熟卵从卵巢腔挤出，将精巢结合，从而获得单个个体自体受精的全雌纯合体黄颡鱼克隆群体。

公开(公告)号：CN114182024B

公开(公告)日：2023-08-04

申请号：CN202111504370.5

申请日：2021-12-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 沈志刚 ,  管赫赫 ,  于跃 ,  刘娅 ,  李波 ,  丁洋 ,  鲁子怡 ,  耿龙慧 ,  别汉晴 ,  胡晨昊

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种利用5S rRNA进行鱼类卵巢发育数量化的分子生物学方法，包括如下方法：获取特定鱼类雌鱼不同发育时期的卵巢样品，测定各发育时期的卵巢样品中5S rRNA占总RNA的比值以及初级卵母细胞体积占所有卵母细胞总体积的比值，构建5S rRNA占比与初级卵母细胞体积占比相关关系的公式，通过5S rRNA占比即可计算出初级卵母细胞体积占比，根据初级卵母细胞体积占比判断雌鱼卵巢发育的阶段。该方法解决了现阶段鱼类卵巢发育未建立有效数量化方法、卵巢发育判断标准不明确、主观性强、判断步骤繁琐、耗时长、取样致死等问题，可以通过非致死方式采取微量卵巢组织进行鱼类卵巢发育阶段的准确判断。

公开(公告)号：CN113528676A

公开(公告)日：2021-10-22

申请号：CN202110844483.3

申请日：2021-07-26

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 沈志刚 ,  别汉晴 ,  胡晨昊 ,  李波 ,  于跃 ,  鲁子怡 ,  耿龙慧 ,  樊启学 ,  袁勇超

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6879

Abstract: 本发明公开了一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，步骤是：(1)利用总RNA提取试剂盒或TRIzol试剂常规提取动物细胞总RNA的方法，提取鱼类性腺组织总RNA，利用核酸分析仪测定OD260/280值，判断RNA纯度；利用琼脂糖凝胶电泳法分离总RNA，观察5S rRNA,18S rRNA和28S rRNA的亮度和分布；(2)将提取的性腺总RNA进行微毛细管电泳，根据核酸分析软件所得出的RNA类型覆盖区域面积大小，计算其中5S rRNA占总RNA的比例；(3)根据5S rRNA占总RNA比例判断鱼类早期发育阶段的生理型雌雄，其中5S rRNA比例小于或等于9.0％时判断为精巢组织，5S rRNA比例大于或等于12％时判断为卵巢组织。方法易行，操作简便，在12小时以内实现了100尾以上鱼类个体的生理型性别鉴定，确定了鱼类生理性别。

公开(公告)号：CN113287547A

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN202110707590.1

申请日：2021-06-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 沈志刚 ,  胡晨昊 ,  别汉晴 ,  李波 ,  樊启学 ,  袁勇超

IPC: A01K61/10 ,  A23K50/80 ,  A23K20/174 ,  A23K10/16 ,  A23K10/20 ,  A23K20/184

Abstract: 本发明公开一种全雄加州鲈生产体系的建立方法，步骤是：（1）驯食：在加州鲈幼鱼性别分化前驯食成吃人工配合饲料；（2）性逆转：在性别分化敏感期利用激素处理加州鲈幼鱼，逆转为具有生殖功能的生理型雌鱼；（3）亲本维生素强化：经激素处理亲鱼，从其性成熟前3个月开始在饲料中添加维生素进行营养强化；（4）测交：生理型雌鱼与正常雄鱼配对产卵，通过其子代性别比例，推断激素处理亲本的性别遗传类型；（5）性逆转雌鱼扩群：用前述同样方法进行性激素处理，待测交结果出来时，将性逆转雌鱼子代保留作为繁殖亲本；（6）将性逆转子代经性激素处理的个体作为母本群体，将正常雄鱼作为父本群体，建立可持继生产全雄加州鲈苗种的生产体系。