公开(公告)号：CN102492037A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110407999.8

申请日：2011-12-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 廖玉才 ,  刘锦龙 ,  李和平 ,  张静柏

IPC: C07K16/14 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种高亲和力镰刀菌特异单链抗体及制备方法，其步骤：A、对禾谷镰刀菌细胞壁特异抗体CWP2进行基因突变。B、构建突变抗体文库。C、利用噬菌体展示对突变抗体库进行淘选，富集得到抗体蛋白。D、PhageELISA分析富集的突变体与禾谷镰刀菌细胞壁蛋白的结合能力。E、表达ELISA鉴定步骤D中得到的突变抗体与亲本抗体CWP2对禾谷镰刀菌细胞壁蛋白结合的强弱。F、表达ELISA鉴定为高亲和力的抗体与禾谷镰刀菌细胞壁蛋白做Westernblot分析。G、鉴定为高亲和力的单链抗体与亲本抗体CWP2做表面等离子共振检测，证明高亲和力的单链抗体与禾谷镰刀菌细胞壁蛋白的亲和力是亲本抗体CWP2的15倍。这个高亲和力单链抗体丰富了赤霉病抗源，为培育小麦赤霉病高抗品种奠定了基础。

公开(公告)号：CN102492037B

公开(公告)日：2013-10-30

申请号：CN201110407999.8

申请日：2011-12-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 廖玉才 ,  刘锦龙 ,  李和平 ,  张静柏

IPC: C07K16/14 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种高亲和力镰刀菌特异单链抗体及制备方法，其步骤：A、对禾谷镰刀菌细胞壁特异抗体CWP2进行基因突变。B、构建突变抗体文库。C、利用噬菌体展示对突变抗体库进行淘选，富集得到抗体蛋白。D、PhageELISA分析富集的突变体与禾谷镰刀菌细胞壁蛋白的结合能力。E、表达ELISA鉴定步骤D中得到的突变抗体与亲本抗体CWP2对禾谷镰刀菌细胞壁蛋白结合的强弱。F、表达ELISA鉴定为高亲和力的抗体与禾谷镰刀菌细胞壁蛋白做Westernblot分析。G、鉴定为高亲和力的单链抗体与亲本抗体CWP2做表面等离子共振检测，证明高亲和力的单链抗体与禾谷镰刀菌细胞壁蛋白的亲和力是亲本抗体CWP2的15倍。这个高亲和力单链抗体丰富了赤霉病抗源，为培育小麦赤霉病高抗品种奠定了基础。